帕金森病大鼠模型中左旋多巴诱导异动症的建立

摘要

来源：Caulfield, M. E., 等 帕金森病大鼠模型中左旋多巴诱导的运动障碍的诱导与评估。J. Vis. Exp. (2021)。

本视频展示了通过给予左旋多巴联合多巴胺转化抑制剂，在帕金森病大鼠模型中诱导左旋多巴诱导性运动障碍的过程。反复注射会过度刺激脑神经元，导致运动功能障碍。

方案

所有涉及动物模型的操作均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 试剂与耗材的准备

1. 确定左旋-3,4-二羟基苯丙氨酸甲酯盐酸盐（左旋多巴或 L-DOPA）和盐酸苯丝肼（一种外周脱羧酶抑制剂，请参见材料表）的剂量、评估频率以及适合研究问题的实验时间线（图1）。
   注意：研究问题可涉及多种答案，范围包括特定疗法是否可能减轻已存在的左旋多巴诱导的运动障碍（LID），到预防LID的发生。还可探讨治疗效果是否依赖于左旋多巴的剂量，或LID的表达和/或治疗效果是否因受试动物的性别、物种和年龄而异。
2. 每周称量大鼠体重，根据研究期间持续的体重变化计算合适的药物用量。
   注意：由于LID阳性大鼠活动增加，长期使用左旋多巴治疗可能导致体重下降。若出现体重减轻，在注射左旋多巴后可给予营养全面且适口性高的零食（请参见材料表）。
3. 计算每周所需左旋多巴和苯丝肼的用量，按每日注射量称取冻干粉剂，混合后置于玻璃棕色瓶中，在-20 °C保存1–2周，直至给药当日使用。
   注意：目标剂量为12 mg/kg，即每1000 g体重给予12 mg左旋多巴。....

结果

图 1：治疗时间线示例。 一个为期共 12 周的左旋多巴（L-DOPA）剂量递增治疗时间线示例，其中在 6-OHDA 损毁后第 3 周开始左旋多巴注射，持续 8 周，随后进行 4 周的实验性治疗。在此示例中，左旋多巴每周皮下注射 5 次（周一至周五），每天大致相同时间给药，每种规定剂量（3、6、9 和 12 mg/kg）均持续 2 周。在每个左旋多巴剂量水平的第 1、6 和 10 天进行行为学 LID 评分。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
100 分钟数字计时器	Staples	1111764
Compass CX 紧凑型天平	Ohaus	30428202
5-(2-氨基乙基)-1,2,4-苯三酚单氢溴酸盐	Cayman Chemicals	25330	6-OHDA 是一种儿茶酚胺能神经毒素，用于在啮齿类动物中诱导多巴胺能损伤和帕金森样症状。
Allentown 大鼠笼具	Allentown, LLC	Rat900	Allentown 笼具可从各个方向观察大鼠。
BD 过敏科托盘，带永久性针头	BD	BD 305540	用于皮下注射 L-DOPA
盐酸苄丝肼	Sigma-Aldrich	B7283	苄丝肼是一种外周脱羧酶抑制剂，与 L-DOPA 联用，用于在帕金森病啮齿类模型中诱导运动障碍。
琥珀色玻璃闪烁小瓶	Thermo Scientific	B7921	用于在 -20 °C 下储存 L-DOPA/苄丝肼，直至与无菌生理盐水混合。
盐酸 L-3,4-二羟基苯丙氨酸甲酯	Sigma-Aldrich	D1507	L-3,4-二羟基苯丙氨酸甲酯是 L-DOPA 的前体物质，可穿过血脑屏障，用于治疗啮齿类动物的帕金森样症状。
Paper Mate Sharpwriter 机械铅笔	Staples	107250
啮齿类动物营养全面的强化零食	Bio-Serv	F05478
带盖圆形冰桶，2.5 L	Corning	432129
标准塑料文件夹板	Staples	1227770
钢丝制 6 英尺长可移动货架单元	Uline	H9488	宽度/高度可根据实验所需或每组大鼠数量进行调节
无菌生理盐水 0.9%	Covidien/Argyle	1020	用于与 L-DOPA/苄丝肼混合