在大鼠中进行胸段脊髓半切手术

摘要

来源：Brown, A. R.，等，大鼠胸段脊髓半切手术及开放场地运动功能评估 J. Vis. Exp. （2019年）。

本视频演示了在大鼠中进行胸段脊髓半切手术的操作步骤。内容包括暴露T8脊髓节段、实施单侧脊髓半切以中断一侧的神经传导束，以及术后护理的详细过程。

方案

所有涉及动物模型的操作均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 胸部半切手术

1. 穿戴适当的防护装备（手套、口罩和手术服），以维持手术所需的无菌环境。使用酒精棉片清洁手术区域，并在手术区域铺上无菌手术巾。对手术器械进行灭菌处理后放置于手术区域。
2. 使用异氟烷气体（3%诱导，0.5−3%维持）与氧气（1 L/min）混合麻醉大鼠。通过检测足趾夹捏 和角膜反射是否消失，确认达到合适的手术麻醉深度。在整个手术过程中持续监测大鼠状态，并根据需要调整麻醉剂用量以维持手术麻醉深度。
3. 剃除从颈部至髋部的背部躯干毛发，将大鼠置于手术区域，使用酒精棉片和聚维酮碘溶液对切口部位进行消毒，并使用直肠温度计监测、通过反馈控制加热垫维持核心体温在37 °C。
4. 在眼睛上涂抹眼用软膏以保持湿润，并在手术过程中根据需要重复涂抹。
5. 使用手术刀在覆盖T6−T10椎体的皮肤上做一条2.5 cm长的切口。使用钝头解剖剪分离皮肤及浅层脂肪。
   注意：T6−T10椎体节段可通过从颅底向头侧轻柔触诊背部脊柱节段来识别，起始于明显的第2^nd 胸椎隆起；或通过触诊最尾端的游离肋骨，该肋骨可引起第13^th 胸椎的活动，从而从尾侧定位。
6. 使用钝头解剖剪和自持式牵开器分离附着于T7−T9椎体背侧的椎旁肌。使用精细镊子和棉签清除残留组织，暴露棘突和椎板。
   注意：本步骤及后续操作在显微镜下观察（约5−15倍）可显著提高操作精度。
7. 使用精细骨剪在T7和T8椎体双侧小心剪除关节突（关节突关节）。使用手术刀在T8与T9椎板之间的背侧结缔组织浅层做切口（深度约1 mm），注意避免损伤下方的脊髓。
8. 使用骨剪切除T8椎体的棘突。用弯止血钳小心夹住T7棘突，将T8椎板的尾端轻微向头侧旋转（约20°），将骨剪插入T8椎板下方，沿中线做纵行切割。继续在横突内侧的椎板左右两侧重复切割，完成椎板切除术，以充分暴露脊髓。
   注意：需小心清除椎板切除过程中产生的所有骨碎片。
9. 在暴露的椎管内滴加利多卡因（2%，0.1 mL），使用精细镊子和虹膜剪去除覆盖T8脊髓节段的硬脊膜。再次向暴露的脊髓滴加利多卡因，并通过观察由T7−T9椎体棘突延伸形成的中线来确定脊髓中线。
   注意：除T7和T9的棘突外，T8节段暴露的背根神经节也可辅助中线定位。可将一根30 G针头置于脊髓中线，以辅助后续半横断操作。
10. 使用解剖刀从脊髓中线向一侧进行半横断。注意避免切穿腹侧的脊前动脉（勿对椎体施加过大压力）。使用虹膜剪小心剪断脊髓损伤侧残留的任何组织，确保腹外侧象限被完全横断。
11. 在暴露的脊髓上方放置一块无菌生理盐水浸湿的止血海绵（约6 × 2 mm），并缝合肌肉层（4-0聚乳酸-羟基乙酸共聚物缝线）。随后缝合切口周围的皮肤。
12. 术后立即给予充分镇痛（皮下注射布托啡诺 0.05 mg/kg）、抗生素（皮下注射恩诺沙星 10 mg/kg）以及补充丢失的体液（腹腔注射乳酸林格液 5 cc）。
13. 将大鼠从麻醉状态中移出，置于温暖环境中（加热垫或加热灯下，约33 °C），直至动物完全清醒。
14. 术后前3天每日给予辅助镇痛，并持续监测疼痛、体重减轻、排尿异常、感染、伤口愈合问题或自噬行为等迹象。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
Baytril	CDMV	11242
钝头解剖剪刀	World Precision Instruments	503669
盐酸布托啡诺	CDMV
压缩氧气	Praxair
棉签	CDMV	108703
精细骨剪	Fine Science Tools	16109-14
解剖刀	Fine Science Tools	10055-12
Dumont 精细镊子 (#5)	Fine Science Tools	11254-20
Ethicon Vicryl 4/0 紫色编织 FS-2 缝线 (J392H)	CDMV	111689
反馈控制加热垫	Harvard Apparatus	55-7020
雌性 Long-Evans 大鼠	Charles River Laboratories	品系编号：006	225–250 g
明胶海绵	CDMV	102348
弯血管钳	Fine Science Tools	13003-10
热珠灭菌器	Fine Science Tools	18000-45
水凝胶	70-01-5022	Clear H20
异氟烷	CDMV	118740
乳酸林格氏液	CDMV	116373
利多卡因 (2%)	CDMV	123684
30 号针头	CDMV	4799
眼科软膏	CDMV	110704
生理盐水	CDMV	1399
聚维酮碘	CDMV	4568
啮齿类动物液体饲料	Bioserv	F1268
11 号手术刀片	CDMV	6671
自持式牵开器	World Precision Instruments	14240
Vannas 虹膜切除弹簧剪	Fine Science Tools	15002-08
兽用麻醉机及异氟烷蒸发器	Dispomed	975-0510-000