建立戊烯四唑诱导的小鼠癫痫发作模型

所有涉及动物模型的程序均已由当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会审查。

1. 戊烯四唑 （PTZ）

1. 将 2 mg/mL PTZ 溶于无菌 0.9% （w/v） NaCl 中。使用当天准备 PTZ。

2. 注射 PTZ

1. 在上午 9：00 至中午 12：00 之间执行所有实验。
2. 测量动物的体重。
3. 将动物放在观察室中以供习惯。
4. 在适应期（3 分钟）内，根据动物的体重和先前确定的注射剂量计算用于注射的 PTZ 溶液的体积。
   注： 例如，当使用 35 mg/kg PTZ 时，一只体重为 25 g 的小鼠需要 0.875 mg PTZ（35 mg/kg x 0.025 kg = 0.875 mg）。因此，应注射 437.5 μL 的 2 mg/mL PTZ 溶液 （0.875 mg / 2 mg/mL = 0.4375 mL）。PTZ 的注射剂量取决于小鼠基因型和品系。对于野生型 C57BL/6 小鼠，建议第一次试验的剂量为 30-35 mg PTZ/kg 体重。对 PTZ 的敏感性取决于所使用的小鼠品系。注射剂量根据实验目的而变化。
5. 用连接到 27 号针头的 1 mL 注射器腹膜内注射 PTZ，注射到动物腹部的左象限或右象限。避免在中线注射。
   1. 避免在同一位置重复注射。
6. PTZ 给药后 30 分钟观察动物行为 （图 1A） 并对异常行为进行分类和评分，如下所示。如果可能，将动物观察 24 小时，或注射后至少再观察 6-10 小时，特别是一旦癫痫发作严重程度评分达到 3 分或以上。
   1. 注意动物在 30 分钟观察期后的任何轻度癫痫发作或行为变化。这种延长的观察期可能解决了亚惊厥剂量的 PTZ 在癫痫慢性无端癫痫发作中特别重要和完整的影响。
   2. 此外，测量每次观察到的癫痫发作的癫痫发作持续时间，因为癫痫发作持续时间的变化与癫痫发作的严重程度有关。此外，PTZ 注射后到第一次癫痫发作的潜伏期是另一个需要收集的重要指标。监测癫痫发作频率、持续时间和潜伏期对于任何癫痫发作后分子研究都至关重要。
7. 每隔一天注射一次 PTZ（图 1A）。进样次数取决于实验的目标。代表性示例如下。
   1. 为了产生完全点燃的动物，一旦动物经历癫痫发作且评分为 5（强直阵挛性癫痫发作），请在另外三次给药中完成注射。在这种情况下，如果癫痫发作评分连续三次给药没有增加，则增加注射剂量。每只动物可以接受不同数量和剂量的 PTZ 注射。
   2. 在每种情况下固定 PTZ 注射的次数和剂量，以评估对 PTZ 的脆弱性，包括抗癫痫药物的评估和转基因小鼠表型的研究。给所有动物相同数量的 PTZ 注射;建议总共注射 8 至 12 次。如果动物死亡，癫痫发作评分应表示为 6。
   3. 确定 10 次或更多次注射维持高癫痫发作评分（4 或 5）所需的注射剂量，以研究癫痫发作发生的组织病理学变化。在这种情况下，总注射次数应在 25 到 30 之间。如果癫痫发作评分达到 5，请减少注射剂量。如果癫痫发作评分降至 3 分或更低，则增加注射剂量。

图 1：协议的简要说明。（A）PTZ 介导的火种示意图。（B）相应癫痫发作评分的代表性动物行为图示。