通过大脑中动脉与颈总动脉阻断在大鼠模型中诱导缺血

摘要

来源：Wayman, C. 等，在老年大鼠中实施永久性远端大脑中动脉联合颈总动脉阻塞以研究皮质缺血伴持续性功能障碍。J. Vis. Exp. (2016)

本视频演示了在老年大鼠中进行远端大脑中动脉永久性阻塞（MCAO）并结合颈总动脉（CCA）结扎以模拟缺血性脑卒中的操作步骤。该方法可阻断脑部血流，导致神经元死亡，从而建立用于研究脑卒中机制及潜在治疗方法的动物模型。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 手术

1. 使用16至18月龄（250至400 g）的雌性老年Lister-Hooded大鼠，以1.5 L/min氧气中含5%异氟烷诱导麻醉₂麻醉诱导后，降低异氟烷浓度，并将其维持在满足手术需求但尽可能低的麻醉深度例如，1.5-2%）。通过面罩向动物输送麻醉剂，并使用废气清除系统以减少外科医生接触异氟烷。
   1. 对假手术动物执行除开颅术以外的所有操作步骤，因为开颅术本身可能导致行为学缺陷。在设计大脑中动脉闭塞（MCAO）实验时，应考虑实验目的，并决定是否设置假手术组以对照开颅术的影响。
2. 术前或围手术期给予镇痛（Carprieve，0.25 mg/kg，皮下注射）。
   1. 加入1 ml至19 ml无菌0.9%生理盐水中配制储备液，按每300 g大鼠注射0.6 ml。优先使用Carprieve而非Carprofen，因为前者在室温（RT）下稳定。
3. 剃除右侧半球颞区和腹侧颈部区域的毛发，以暴露皮肤。使用乙醇棉片对手术部位进行消毒。
   1. 在远离操作区域的位置执行此步骤，以尽量减少切口部位的毛发残留。

结果

图1. 永久性远端大脑中动脉阻塞模型的手术装置。 图中显示了用于大鼠开颅手术的右侧半球手术装置，插图展示了吸引器及围绕颅骨切除部位的生理盐水滴注位置。同时标出了脑血管的关键结构：大脑中动脉（红色）和大脑下静脉（蓝色），阴影区域表示动脉凝固发生的部位。通过在大脑下静脉下方切断大脑中动脉（MCA）来确认阻塞效果。

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材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
卡洛芬	Norbrook	Vm No; 02000/4229	给予 0.25 mg/kg
硫酸阿托品	AmTech	RXATRINJ-100
酒精棉片	UHS	20021
利多卡因乳膏（Emla）	AstraZeneca	12901	在剃毛的颈部和颞区涂抹豌豆大小的一滴
恒温毯系统	Harvard Instruments	507222F
镊子	Fine Science Tools	11019-12
异氟烷	Abbott	B506
丝线缝合线	Harvard Apparatus	723288
电灼系统	Eschmann
0.25 mm 珠宝商电灼镊	Eschmann	8330349
精细 Dumont 镊子	Fine Science Tools	11251-10
拇指驱动生理盐水滴注系统
Vacusafe 吸引系统	INTEGRA BIOSCIENCES	158320
16 mm 粗粒金刚石涂层钢磨头		K801 104 016
手持式牙科钻	NSK	NSKVMAXVRE (Handpiece NSKEX6B)
Vannas 弹簧剪刀	Fine Science Tools	15000-03
显微血管剪刀	World Precision Instruments	501790
4-0 Vicryl 缝合线	Ethicon
血管夹及施夹器
手术显微镜	Zeiss
紧凑型单气体异氟烷麻醉系统 K/F	VetTech Solutions
碳钢手术刀片 10 号	Swann-Morton	201
25G 针头	Terumo	NN-2525R
注射器（1 ml 和 5 ml）	Terumo	SS+01T1 / SS*05SE1
生理盐水（0.9% 氯化钠）	Fresenius Kabi	Pl 08828/0178
棉签	Johnson and Johnson	5.00021E+12	使用前灭菌
纱布			使用前灭菌