慢病毒介导的人类神经元转导用于 Tau 蛋白聚集分析

摘要

来源：Aulston, B.，等。利用慢病毒介导的人类神经元转导研究 Tau 蛋白聚集的体外模型 

本视频展示了利用编码突变型人源tau蛋白并标记黄色荧光蛋白（YFP）的慢病毒转导人神经元细胞，以研究蛋白聚集的过程。该方法详细阐述了从病毒进入细胞到突变型tau蛋白表达的各个步骤，最终在神经元中形成可见的细胞质tau蛋白聚集体。

方案

1. 培养基与试剂的准备

1. 在 4 °C 下解冻用于培养板的基底膜基质涂层（切勿让基底膜基质升温，否则会凝固）。分装成 1 mL 等份，于 -20 °C 或 -70 °C 保存。
2. 将碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）用无菌磷酸盐缓冲液（PBS）重悬至 10 μg/mL，并分装为 10 μL 等份，于 4 °C 保存。
3. 向一个新开封的 500 mL 含谷氨酰胺的 DMEM/F12 培养基中加入 B27（10 mL）、N2（5 mL）和青霉素-链霉素（5 mL）。取 50 mL 此神经干细胞（NSC）培养基至锥形管中，加入 10 μL 的 10 μg/μL bFGF（终浓度为 2 μg/mL）。将添加 bFGF 的 NSC 培养基（NSC (+) bFGF）于 4 °C 保存。
4. 制备不含 bFGF 的培养基（(-) bFGF 培养基）时，采用与步骤 1.3 相同的配方，但不添加 bFGF。该培养基将用于诱导神经干细胞向神经元分化，并在分化后维持神经元培养。

2. 慢病毒载体构建

注意：在开始使用慢病毒载体之前，须确保实验室已获得使用生物安全二级（BSL-2）试剂的批准。此外，操作慢病毒载体时，必须使用生物安全二级（BSL-2）的细胞培....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
10 cm 培养皿	Thermofisher	12556002
50 mL 离心管	Biopioneer	CNT-50
喷瓶中的 70% 乙醇	多种来源	NA
B27 添加剂	Thermofisher	17504044
基底膜基质（Matrigel）	Corning	356231
碱性成纤维细胞生长因子（basic FGF）	Biopioneer	HRP-0011
牛血清白蛋白	Sigma	A7906
细胞培养孵育箱	多种来源	NA
离心机	多种来源	NA
含谷氨酰胺的 DMEM-F12 培养基	Thermofisher	10565042
乙醇（浓度 50% 或更高）	多种来源	NA
人神经干细胞	多种来源	NA
慢病毒载体	多种来源	定制订单
N2 添加剂	Thermofisher	17502048
青霉素-链霉素	Thermofisher	15140122
磷酸盐缓冲液	Thermofisher	14190250
无菌细胞培养操作台	多种来源	NA
水浴锅	多种来源	NA