来源:Schmidt, K. 等,小鼠脑内蓝斑核的定位。J. Vis. Exp. (2019)
本实验方案概述了使用免疫组织化学方法在小鼠脑切片中鉴定蓝斑区域。通过使用绿色荧光标记的抗体靶向多巴胺β-羟化酶,可在显微镜下将产生去甲肾上腺素的神经元显示为绿色荧光。
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2025年7月8日
来源:Schmidt, K. 等,小鼠脑内蓝斑核的定位。J. Vis. Exp. (2019)
本实验方案概述了使用免疫组织化学方法在小鼠脑切片中鉴定蓝斑区域。通过使用绿色荧光标记的抗体靶向多巴胺β-羟化酶,可在显微镜下将产生去甲肾上腺素的神经元显示为绿色荧光。
所有涉及动物样本的实验程序均已通过相应的动物伦理审查委员会的审核与批准。
1. 脑切片
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图 1:通过脑切片 DBH 或 TH 免疫染色检测蓝斑核(LC)。 (a) 一只小鼠脑组织在脑干周围被切成 50 μm 厚的切片,并收集于两个 24 孔板中。每隔第 5 至第 8 片收集的脑切片被贴附在覆盖有薄膜的盖玻片上,用于 X 射线荧光显微成像(XFM)。这些切片在孔之间以蓝色数字标记。相邻的漂浮在磷酸盐缓冲液(PBS)中的切片则进行 DBH 免疫染色以检测蓝斑核(在孔上以红色叉号标记)。绿色圆圈表示 DBH 信号阳性的切片,因此含有蓝斑核。 (b) 一张包含蓝斑核的冠状脑切片经 DBH 免疫染色后,在共聚焦显微镜下成像。图像显示蓝斑核区域有强烈的绿色信号。 (c) 一张包含蓝斑核的冠状切片经酪氨酸羟化酶(TH)免疫染色后,在荧光.......
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| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| 成年小鼠脑切片矩阵 | Zivic Instruments | BSMAS001-1 | |
| 驴抗兔二抗,Alexa Fluor 488 标记 | Thermo Fisher Scientific | A-21206 | |
| 带电玻璃载片 | Genesee | 29-107 | |
| 共聚焦显微镜 | Zeiss | LSM 800 | |
| 冷冻切片机 | Microm GmbH | HM 505E | |
| 冷冻切片机刀片 | Thermo Fisher Scientific | MX35 | |
| 微型剪刀,9.5 cm | Antech Diagnostcs | 503241 | |
| DAPI(4',6-二脒基-2-苯基吲哚) | Sigma-Aldrich | D9542-10MG | |
| 多巴胺β-羟化酶(DBH)抗体——实验室自制(来源:兔) | B. Eipper | - | |
| 多巴胺β-羟化酶(DBH)抗体——商业可得(来源:兔) | Cell Signaling | 8586 | |
| Falcon 管,50 ml | USA Scientific | 339652 | |
| 异氟烷(Forane) | Baxter | NDC 1019-360-60 | |
| 显微有齿镊(Micro Adson 镊) | Antech Diagnostcs | 501245 | |
| 硬性封片介质 | EM sciences | 17984-24 | |
| 显微镜 | Pascal | LSM 5 | |
| 多孔板,24 孔 | Thermo Fisher Scientific | 930186 | |
| 最佳切割温度包埋剂(OCT) | VWR/ tissue tech | 102094-106 | |
| 多聚甲醛(PFA)/ 10% 甲醛 | Fisher Scientific | SF98-4 | |
| 一次性 Peel-A-Way 包埋模具 | Polysciences Inc. | 18646A | |
| 画笔 | |||
| 磷酸盐缓冲液(PBS) | Life Tech | 14190250 | |
| 剃须刀片 | Amazon | ASIN: B000CMFJZ2 | |
| 刮勺 | Antech Diagnostcs | 14374 | |
| T 形针 | Office Depot | 344615 | |
| 《立体定位坐标系中的小鼠脑》,Paxinos 与 Franklin,第 3 版 | Amazon | ISBN: 978-0123694607 | |
| Triton-X 100(用于配制 PBSD) | Sigma-Aldrich | T8787 | |
| Tween 20 | Sigma-Aldrich | P7949-500ml | |
| 酪氨酸羟化酶(TH)抗体(来源:兔) | EMD Millipore | AB152 | |
| 宽场荧光显微镜 | Zeiss | Axio Zoom.V16 |
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