寨卡病毒感染胎儿神经干细胞

摘要

来源：McGrath, E. L., 等，人胎儿脑神经干细胞的寨卡病毒感染用于免疫细胞化学分析。J. Vis. Exp. (2018)

本视频展示了一种用寨卡病毒感染人类胎儿神经干细胞的操作流程。感染后的细胞可用于进一步的研究。

方案

1. 寨卡病毒感染

注意：ZIKV 对温度高度敏感，因此必须将 ZIKV 储存在 -80 °C，避免冻融循环。工作用分装样品应置于冰上保存。

1. 传代细胞。接种一个24孔板总共需要300万至400万个细胞，因此在传代时，应将感染和接种所需的细胞数量放入培养瓶中。
2. 若将细胞接种至24孔板用于染色，请预先准备该板 [用无菌水配制的0.01%多聚-D-赖氨酸（PDL）包被含有盖玻片的孔，每孔加入250 μL，37 ˚C孵育1小时]。
3. 传代后，取1 mL细胞悬液加入1.5 mL微量离心管中，在室温下以200 × g离心5分钟，然后通过抽吸去除上清液。
4. 将细胞沉淀重悬于ZIKV病毒原液中，以获得1至10的感染复数（MOI）。ZIKV溶液的体积不应超过0.5 mL。对于模拟处理（对照细胞），用与ZIKV病毒原液相同类型和体积的培养基重悬细胞。
5. 将上述细胞/ZIKV混合物在37 °C孵育1小时。期间轻柔倒置管2-3次，然后在室温下以216 × g离心5分钟，获得细胞沉淀。用dPBS重悬沉淀后，再次在室温下以216 × g离心5分钟。
6. 通过抽吸去除上清液，用适当的培养基重悬细胞，并将感染后的细胞接种至实验所需的培养瓶或培养板中。若接种至24孔板，则将沉淀重悬于12 mL适当培养基中，每孔加入500 μL悬液。
   注意： 此时可继续使用生长培养基培养细胞，以观察ZIKV对干细胞的影响；或直接进入步骤6或7，研究ZIKV对分化过程的影响。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
DMEM	Gibco	11965-092
F12	Gibco	11765-054
葡萄糖（10%）	Sigma	G8644
HEPES（1 M）	Corning/cellgro	25-060-c1
青霉素-链霉素（100倍）	Gibco	15140-122
二氧化碳培养箱	Thermo Forma	型号# 3110
离心机	Thermo Fisher Scientific	75004221
生物安全柜	Forma Scientific 二类 A/B3 型	型号# 1284
聚-D-赖氨酸氢溴酸盐（PDL）	Sigma	P6407-5MG
层粘连蛋白	Invitrogen	23017-015