使用神经肽受体激动剂刺激背根神经节感觉神经元

摘要

来源：Lin, Y.，等，背根神经节的分离与原代培养以研究神经递质释放。J. Vis. Exp. (2018)

本视频展示了利用转染的背根神经节细胞，通过神经肽受体激动剂刺激来研究神经递质释放的方法。

方案

1. 从原代背根神经节细胞释放神经递质

1. 第6天，在细胞接种后（siRNA转染72小时后），更换为200 µL无血清培养基，于37 °C CO₂培养箱中孵育30分钟。
2. 加入1 µL刺激性化学物质，并通过移液轻轻混匀培养基。将培养皿置于37 °C CO₂培养箱中孵育指定时间。
   注意：本文中，培养的细胞使用NPFFR2激动剂dNPA（D.Asn-Pro-(N-Me)Ala-Phe-Leu-Phe-Gln-Pro-Gln-Arg-Phe-NH2，5 nmol）刺激1小时。
3. 从培养皿中收集培养上清液，在4 °C条件下以5,000 × g离心5分钟，以去除悬浮杂质。
4. 收集离心后的上清液，根据需要使用磷酸盐缓冲液（PBS）稀释样品，然后使用酶免疫分析（EIA）试剂盒检测神经递质水平。
   注意：此处，在分析CGRP水平前将上清液按1:100稀释；在分析SP水平前未对上清液进行稀释。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
DMEM-F12	Invitrogen	12400024	培养基
汉克斯平衡盐溶液	Invitrogen	14170-112	培养基
巴斯德吸管	Hilgenberg	3150102	细胞吹打
dNPA	Genemed Synthesis	N/A	NPFFR2 激动剂