测量大鼠大脑中动脉闭塞后脑梗死区域和脑水肿

摘要

来源：Frank, D.，等。在一组啮齿类动物脑样本中同时测量卒中后脑水肿、梗死区域及血脑屏障破坏。J. Vis. Exp. (2020)。

本视频演示了如何评估经大脑中动脉阻塞处理的大鼠脑切片中的梗死区域和脑水肿。使用氧化还原染色法识别梗死区域，同时通过图像分析软件中的蓝色滤光片和阈值功能，对受损半脑的梗死区域和水肿进行定量分析。

方案

所有涉及动物样本的实验程序均已通过相应的动物伦理审查委员会审核并批准。

1. 梗死区域的确定

1. 在大脑中动脉闭塞（MCAO）后24小时测量梗死区（IZ）。
   注意：体重减轻超过20%、出现癫痫发作或偏瘫的大鼠将被排除在实验之外。
2. 通过将吸入气体混合物更换为20%氧气和80%二氧化碳，直至大鼠自主呼吸停止，实施安乐死。
3. 使用剪刀和手术镊子，在肋骨下方经腹壁做5-6 cm的侧向切口，打开胸腔。
4. 使用剪刀和手术镊子，沿整个肋骨长度进行膈肌切开。
5. 小心移开肺组织，从左右两侧剪开肋骨直至锁骨。
6. 通过左心室灌注200 mL生理盐水。
7. 用剪刀穿刺或切开右心房。
8. 使用断头器进行断头，并收集脑组织。
9. 使用虹膜剪，从枕骨大孔沿后颅骨表面两侧向远端剪开。
10. 将嗅球、颅骨腹侧和背侧的神经连接与脑组织分离。
11. 将脑组织从头部取出。
12. 使用厚度为0.009英寸的未涂层单边不锈钢剃须刀片，制作2 mm厚的水平切片，共制备6个脑切片。
13. 在0.05% TTC溶液中37 °C孵育30分钟。
14. 将脑组织置于显微镜载玻片上，以1600×1600 dpi分辨率对这6个脑....

结果

图1： 脑切片扫描示例。

图 2： 假手术组与MCAO大鼠代表性脑切片。

（A-B）原始扫描图像。（C-D）转换为灰度图像。（E-G）阈值函数处理。（G-H）应用蓝色滤.......

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
大脑 & 组织基质	Sigma-Aldrich	15013
光学扫描仪	佳能	Cano Scan 4200F	分辨率 3200 x 6400 dpi
培养皿	Sigma-Aldrich	P5606
11号手术刀片	Sigma-Aldrich	S2771
软件
Adobe Photoshop CS2 for Windows	Adobe
ImageJ 1.37v	美国国立卫生研究院		源代码可免费获取。作者 Wayne Rasband（wayne@codon.nih.gov）来自美国马里兰州贝塞斯达市国家精神卫生研究院研究服务部
Office 365 ProPlus	微软	-	Microsoft Office Excel
Windows 10	微软
试剂
2,3,5-三苯基氯化四氮唑	Sigma-Aldrich	298-96-4
2%伊文思蓝	Sigma-Aldrich	314-13-6