肾动脉交感神经去神经术在血管紧张素II诱导的高血压小鼠模型中的应用

摘要

来源：Wang, M., 等，改良的肾去神经术缓解了血管紧张素II输注诱导的高血压。 J. Vis. Exp. (2022)

本视频演示了在血管紧张素II诱导的高血压小鼠模型中，采用苯酚破坏肾动脉交感神经功能以降低血压的操作步骤。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 双侧肾去神经支配

1. 在血管紧张素 II（Ang II）灌注 1 周后，选择血压（BP）≥140/90 mmHg 或收缩压/舒张压升高 25% 的小鼠。
2. 手术前记录动物体重，并选择体重不低于 24 g 的小鼠进行肾去神经手术。
3. 使用戊巴比妥钠麻醉小鼠，并通过夹捏足趾无反应来确认麻醉深度。
4. 使用剃毛器去除腹部毛发。操作时应仔细彻底，以避免手术污染。
5. 将小鼠仰卧位固定于手术台上，用胶带固定四肢。先用聚维酮碘对腹部皮肤进行消毒，再用 70% 乙醇擦拭三次。
6. 使用手术刀片沿腹中线做一条长约 2 cm 的腹正中切口。用浸有 37 °C 生理盐水的纱布轻轻推开肠管，暴露左侧肾动脉。使用弯头镊子小心且钝性地分离肾动脉周围的脂肪组织（图 1A-C）。
7. 用无菌锋利剪刀将称量纸剪成与肾动脉大小相同的矩形。作为参考，可按照 图 1C 中虚线所示尺寸进行裁剪。
   注意：手术中的关键步骤是尝试一次性裁剪出多个形状一致的称量纸片，以保证一致性。
8. 将称量纸浸入 10% 苯酚/乙醇溶液中至少 30 秒。将其覆盖于左侧肾动脉表面，并包裹血管，保持 2 分钟（图 1D）。使用纱布保护周围组织，防止称量纸接触邻近的肾脏和肠管。
   ​注意：苯酚溶液在塑料管中稳定，但在玻璃瓶中不稳定。因此，每次实验均需新鲜配制该溶液。
9. 对右侧肾动脉执行相同操作。假手术组使用浸有生理盐水的称量纸进行处理。
10. 将肌肉复位至原始位置，用 6-0 Vicryl 缝线间断缝合腹膜。随后用 4-0 尼龙缝线间断缝合皮肤。密切监测所有小鼠，直至其完全苏醒。

2. 术后护理

1. 在切口处涂抹聚维酮碘，并将动物置于预热的电热毯上进行恢复及术后监测。
2. 每天监测小鼠两次，评估是否存在红肿、疼痛或腹部感染。在肾去神经支配（RDN）手术前约1小时和术后24小时，为所有小鼠皮下注射美洛昔康（0.5 mg/kg）。

结果

图1：使用称量纸进行肾去神经术的操作步骤。 （A,B）C57BL/6（ex vivo）小鼠肾动脉的解剖图像。（C）两条虚线之间的区域表示称量纸覆盖的范围。（D）用浸有10%苯酚/乙醇溶液的适当大小的称量纸覆盖双侧肾动脉表面。称量纸不得超出虚线范围。* 指示称量纸的位置。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
血管紧张素 II	Sangon Biotech	CAS:4474-91-3	用于建立高血压动物模型
血压分析系统	Visitech Systems	BP-2000	测量小鼠血压
微型渗透泵	DURECT Corporation	CA 95014	用于装载血管紧张素 II
称量纸	Sangon Biotech	F512112	用浸有苯酚的称量纸破坏肾神经；https://www.sangon.com/productDetail?productInfo.code=F512112.