一种立体定向引导消融技术用于大鼠听觉皮层去除

Abstract

资料来源：Lamas， V.， et al。大鼠听觉皮层的立体定向引导消融，以及大脑中病变的定位。 J. Vis. Exp. （2017）.

该视频演示了一种用于消融大鼠听觉皮层的立体定向引导外科手术。这些步骤包括识别固定在立体定向框架中的麻醉大鼠的解剖标志，在听觉皮层上方的颅骨上创建一个窗口，抽吸皮质层，并提供术后护理以评估消融对声音处理的影响。

Protocol

所有涉及动物模型的程序均已由当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会审查。

1. 老鼠的准备

注意：我们在雄性大鼠中进行了实验，以避免任何荷尔蒙变化。

1. 使用肌肉注射盐酸氯胺酮（30 mg / kg）和盐酸甲苯噻嗪（5 mg / kg）的混合物麻醉动物;使用此剂量，大鼠应深度麻醉约1小时。
2. 捏老鼠的脚趾;没有撤退反射表明动物完全失去知觉。如果大鼠对捏有反应，则以初始剂量的三分之一进行补充麻醉。
3. 剃掉头皮并用聚维酮碘对手术区域进行消毒。
4. 将动物放在加热垫上以保持 38 °C 的温度，并使用两个耳杆和一个咬杆将动物的头部稳定在立体定位框架中。小心避免用耳杆刺穿鼓膜。
5. 通过在每只眼睛上滴一滴眼凝胶或血清盐水来保护眼睛。

2. AC 在大鼠颞骨中的位置

1. 使用手术刀沿中线切开，露出颅骨并缩回覆盖颅骨表面的骨膜。
2. 根据大鼠大脑的 Paxinos 和 Watson 图谱，使用无菌棉签轻轻去除覆盖颅骨表面的任何血液，以可视化 bregma、lambda 和双耳间 0。
3. 用手术刀在颅骨背侧插入点附近的颞肌上做一个切口。使用针头和缝合材料将肌肉拉出，并将缝合材料固定在立体定向框架上;这将显示 Temporal 骨骼。如果发生出血，请用无菌冷盐水冲洗。
4. 将无菌直针放入立体定向显微作器中，确保其完全固定。
5. 慢慢降低针头，直到它正好位于颅骨表面上方，使针尖设置为耳间 0。将此点设置为零并确定从该点开始的坐标。
6. 根据感兴趣的大脑区域，改变立体定向坐标。利用大鼠大脑的 Paxinos 和 Watson 图谱确定这些坐标。确定坐标后，移动指针以匹配这些坐标。
7. 使用以下四个点的坐标靶向 AC：A：前后 （A/P） = -5.8 mm，中外侧 （M/L） = +/- 6.4 mm;B： A/P= -2.7 毫米，M/L= +/- 6.4 毫米;C： A/P= -2.7 毫米，M/L= +/- 8.67 毫米;D： A/P= -5.8 毫米，M/L= +/- 8.67 毫米。将针降低到颞骨的正上方，以可视化这四个点中的每一个。使用记号笔，在颞骨上标记点并连接它们以绘制矩形;矩形将用作在骨骼中打开窗口的指南（图 1）。

3. AC 的手术暴露

1. 使用电钻和小钻头 （0.6 mm Ø） 打开窗户。以 8,000 rpm 的速度钻矩形的周边，直到骨头脱落。用冷无菌盐水冲洗冷却钻孔表面，以防止损坏皮质下结构。当骨骼塌陷时，可以检测到阻力下降。小心不要钻脑子。
2. 当边界松动时，用细镊子拉起覆盖骨并将其储存在寒冷的无菌盐水中。

4. AC 消融

1. 使用手术显微镜 （10X），用显微外科刀轻轻切开脑膜，然后用两个细尖的镊子将其取出。如果发生出血，请用无菌冷盐水冲洗。
2. 使用手术抽吸装置（压力 -0.24 bar）与无菌 20 G 钝头针头耦合，轻轻吸出 AC。这一点很关键，需要非常小心地执行：只吸出六个皮质层，而不吸出下面的白质。
3. 抽吸直至穿孔动脉止血。
4. 抽吸完成后，用提取的骨头覆盖受伤区域，并应用可吸收止血纱布。
5. 让颞肌恢复其原始位置，然后使用伤口夹 （9 mm） 缝合皮肤。涂抹抗生素软膏。继续在伤口上涂抹软膏，每天两次><，持续三天。 注意：每个应用程序都由涂在伤口上的薄层组成。
6. 手术后 1 小时在大鼠背部皮下注射丁丙诺啡 （0.05 mg/kg） 作为镇痛剂，然后在 72 小时内每 8 小时注射一次。
7. 将动物放在加热垫上，直到它醒来，然后将其放回笼子进行恢复。

Results

图 1：大鼠颞骨在三个不同手术步骤中的图像。 （A） 将 AC 的立体定位坐标转移到颞骨。四个点的坐标是：A：A/P= -5.8 mm，M/L= +/- 6.4 mm;B： A/P= -2.7 毫米，M/L= +/- 6.4 毫米;C： A/P= -2.7 毫米，M/L= +/- 8.67 毫米;D： A/P= -5.8 毫米， M/L= +/- 8.67 毫米。（B） 坐标用作参考，在颞骨表面绘制一个矩形，以引导窗户的打开。（C）显示钻孔后在骨骼中打开的窗口。可以在大脑表面观察到带有血管的脑膜。R： 喙部， D： 背侧。

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
立体定位架	大卫·科普夫 Ins.	900
手术显微镜	野生 M650 Heerbrugg
加热垫	达加
牙科微电机	W&H elco	5118
钻石毛刺	布劳恩	编号 GD021R	0.6 毫米
手术抽吸装置	大气	Atmoforte E2
氯胺酮	梅里亚尔		30 毫克/公斤
甲苯噻嗪	拜耳		5 毫克/公斤
显微作器	成重	SM-11
手术刀	劳顿
聚维酮碘	美达	优碘
无菌盐水血清	B.布劳恩
20G无菌针头	泰尔莫·尼奥卢斯
棉花小贴士
缝合材料	B.布劳恩
抗生素软膏	Quadriderm （Betametasona， Gentamicina， Clotrimazol） - 先灵葆雅
镊子	dimeda	10.331.12
手术针	世界精密仪器公司	501940
丁丙诺啡	Indivior 英国	布普雷斯	0.01-0.05 毫克/公斤
剪刀	dimeda	08.120.15
显微手术刀	MSP	7503
可吸收止血纱布	外科手术
缠绕夹	反射 9		9 毫米