评估肌肉收缩与神经肌肉阻滞剂治疗

摘要

来源：Lin, C. U.，等，由人诱导性多能干细胞体外诱导生成神经肌肉接头。J. Vis. Exp. (2020)

本视频展示了利用培养的运动神经元、施万细胞和肌管评估肌肉功能，随后使用神经肌肉阻滞剂抑制收缩。彩色编码的时间-运动图像显示了彩色编码的时间-运动图示，其中红色表示最快的运动，蓝色表示最慢的运动。

方案

1. 肌肉收缩与筒箭毒碱处理

1. 为诱导肌管收缩，向培养基中加入 25 mM 氯化钙（CaCl₂）。肌管的运动可在 1‒2 分钟内观察到。
2. 将 6 孔板置于倒置显微镜载物台上，通过活细胞显微成像技术记录肌管收缩的视频。
3. 为终止肌管收缩，向培养基中加入筒箭毒碱（curare，300 ng/mL），然后按照步骤 1.2 记录视频。
4. 使用运动矢量分析软件打开视频文件，点击“运动分析”按钮以分析视频。
   注意：肌管收缩以时序-运动图形式显示。视频采用颜色编码以显示肌管的运动速度，其中闪烁的彩色信号代表肌管的运动区域，红色表示最快运动速度，蓝色表示最慢运动速度。

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材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
培养基、生长因子和试剂	货号	品牌	目录编号
	B27, Gibco	Gibco	12587-001
	BDNF	R & D Systems	248-BD
	ECM, Matrigel（生长因子减量型）	Corning	356230
	GDNF	R & D Systems	212-GD
	离子镀膜仪	JEOL	JEC3000FC
	活细胞显微镜	Nikon	Eclipse Ti microscope
	运动矢量分析软件	Sony	SI8000
	N2, Gibco	Gibco	17502-048
	Neurobasal 培养基	Gibco	21103-049
	NT3	R & D Systems	267-N3