来源：Sun, Y. Y.，等，一种基于短暂性脑缺氧-缺血的血栓性卒中模型。J. Vis. Exp. (2015)。
本视频展示了通过阻断小鼠右侧颈总动脉并将其暴露于低氧环境中，在小鼠模型中复制血栓性中风的操作过程。该过程会减少向大脑的血液和氧气供应，导致血栓形成及脑损伤。
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方法文章
通过低氧与缺血在小鼠模型中诱导血栓性脑卒中
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2025年7月8日
本文内容
摘要
方案
所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。
1. 实验准备
- 术前至少15分钟，将手术台置于连接热泵、温度设为37 °C的加热垫上预热。在手术台上使用3 ml注射器筒体作为颈托。准备含2%异氟烷的医用空气麻醉气体。
- 准备已灭菌的镊子、剪刀、显微持针器、止血钳、棉签和缝合线。同时准备好组织胶和眼药膏。
- 设置低氧系统及温度控制器，配备加热灯和直肠探头。准备低氧气体，其中含2%异氟烷、7.5% O2，余量92.5% N2作为平衡气体。
- 术前1小时，通过皮下注射缓释美洛昔康（4.0 mg/kg）对小鼠进行镇痛处理。
2. 短暂性脑缺氧缺血（图1B）
- 将体重为22至30克、年龄为10至13周的雄性C57BL/6小鼠置于麻醉诱导舱中，使用3%异氟烷进行麻醉，直至小鼠对足部挤压无反应，然后使用电子剃毛器去除右侧颈部的毛发。
- 将小鼠放置在手术台上，通过医疗空气以2 L/min的流速输送2%异氟烷。使用医用胶带将前肢沿身体两侧拉直并固定在颈部卷垫上。
- 用聚维酮碘对切口部位进行清洁，随后用酒精和棉签擦拭。
- 在解剖显微镜下，使用直镊子和显微剪刀在中线皮肤外侧约0.2 cm处做一条长约0.5 cm的右侧颈部切口。
- 使用一对细齿镊子分开筋膜和组织，暴露右侧颈总动脉（RCCA）。使用一对精细无齿镊子小心地将RCCA与迷走神经分离。
- 在RCCA上打两个预先剪好的5-0丝线活结（可松解），然后使用4-0单丝尼龙缝线缝合皮肤（图1C）。
- 在双眼涂抹眼膏以防止干燥。
- 迅速将小鼠转移至缺氧系统，并将其口鼻置于面罩中，以0.5–1 L/min的流速供给含2%异氟烷的7.5% O2，持续30分钟。
- 在缺氧期间，使用带有加热灯的温控装置将直肠温度维持在37.5 ± 0.5 °C。监测呼吸频率在80–120次/分钟之间。在缺氧期间保持体温高于37 °C对于形成一致的脑梗死至关重要。通常在缺氧20分钟后出现呼吸频率降低。若呼吸频率低于40次/分钟，则移除面罩，恢复常氧供气。此过程持续1–2分钟，不计入30分钟缺氧时间内。
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结果
图1: 成年小鼠短暂性脑缺氧-缺血（tHI）损伤的操作流程。（A）推动血栓形成的Virchow三要素包括血流停滞、内皮损伤以及血液高凝状态。（B）tHI脑卒中操作的示意图。在右侧颈总动脉（CCA）上打两个可松解的结，随后通过鼻罩输送7.5%氧气，持续30分钟，同时维持小鼠直肠温度在37–38 °C。短暂性全身性缺氧结束后，通过牵拉可松解缝线结的一端释放CCA结扎。MCA，大脑中动脉；ICA，颈内动脉；ECA，颈外动脉；CCA，颈总动脉。（C）短暂性右侧CCA闭塞的手术步骤。1. 在分离出的右侧CCA下方放置两条预先剪好的缝线（#1和#2）。2. 打两个可松解的结。3. 使用缝线#3缝合切口。确保缝线#1和#2的线头可从切口外触及。4. 从切口外小心牵拉...
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材料
| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| 成年雄性小鼠 | Charles River | C57BL/6 | 10~13 周龄（22~30 g） |
| 便携式实验动物麻醉系统 | VetEquip | 901807 | 麻醉 |
| 医用空气（压缩）气罐 | Airgas | UN1002 | 麻醉 |
| 异氟烷 | Piramal Healthcare | NDC 66794-013-25 | 麻醉 |
| 多站式实验动物麻醉系统 | Surgivet | V703501 | 低氧系统 |
| 7.5% O₂ 与 92.5% N₂ 混合气罐 | Airgas | UN1956 | 低氧系统 |
| 带加热灯的温度控制器 | Cole Parmer | EW-89000-10 | 温度控制器 |
| 直肠探针 | Cole Parmer | NCI-00141PG | 温度控制器 |
| 体视显微镜 | Olympus | SZ40 | 手术装置 |
| 带加热垫的热泵 | Gaymar | TP700 | 手术装置 |
| 精细弯头镊子（带齿） | FST | 11370-31 | 手术器械 |
| 精细弯头镊子（无齿） | FST | 11373-12 | 手术器械 |
| 显微剪刀 | FST | 15000-03 | 手术器械 |
| 显微持针器 | FST | 12060-01 | 手术器械 |
| 哈尔斯泰德-蚊式止血钳 | FST | 13008-12 | 手术器械 |
| 5-0 丝线缝合线 | Harvard Apparatus | 624143 | 手术耗材 |
| 4-0 尼龙单股缝合线 | LOOK | 766B | 手术耗材 |
| 组织胶 | Abbott Laboratories | NC9855218 | 手术耗材 |
| Puralube Vet 软膏 | Fisher | NC0138063 | 预防眼部干燥 |
