通过低氧与缺血在小鼠模型中诱导血栓性脑卒中

摘要

来源：Sun, Y. Y.，等，一种基于短暂性脑缺氧-缺血的血栓性卒中模型。J. Vis. Exp. (2015)。

本视频展示了通过阻断小鼠右侧颈总动脉并将其暴露于低氧环境中，在小鼠模型中复制血栓性中风的操作过程。该过程会减少向大脑的血液和氧气供应，导致血栓形成及脑损伤。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 实验准备

1. 术前至少15分钟，将手术台置于连接热泵、温度设为37 °C的加热垫上预热。在手术台上使用3 ml注射器筒体作为颈托。准备含2%异氟烷的医用空气麻醉气体。
2. 准备已灭菌的镊子、剪刀、显微持针器、止血钳、棉签和缝合线。同时准备好组织胶和眼药膏。
3. 设置低氧系统及温度控制器，配备加热灯和直肠探头。准备低氧气体，其中含2%异氟烷、7.5% O₂，余量92.5% N₂作为平衡气体。
4. 术前1小时，通过皮下注射缓释美洛昔康（4.0 mg/kg）对小鼠进行镇痛处理。

2. 短暂性脑缺氧缺血（图1B）

1. 将体重为22至30克、年龄为10至13周的雄性C57BL/6小鼠置于麻醉诱导舱中，使用3%异氟烷进行麻醉，直至小鼠对足部挤压无反应，然后使用电子剃毛器去除右侧颈部的毛发。
2. 将小鼠放置在手术台上，通过医疗空气以2 L/min的流速输送2%异氟烷。使用医用胶带将前肢沿身体两侧拉直并固定在颈部卷垫上。
3. 用聚维酮碘对切口部位进行清洁，随后用酒精和棉签擦拭。

结果

图1: 成年小鼠短暂性脑缺氧-缺血（tHI）损伤的操作流程。（A）推动血栓形成的Virchow三要素包括血流停滞、内皮损伤以及血液高凝状态。（B）tHI脑卒中操作的示意图。在右侧颈总动脉（CCA）上打两个可松解的结，随后通过鼻罩输送7.5%氧气，持续30分钟，同时维持小鼠直肠温度在37–38 °C。短暂性全身性缺氧结束后，通过牵拉可松解缝线结的一端释放CCA结扎。MCA，大脑中动脉；ICA，颈内动脉；ECA，颈外动脉；CCA，颈总动脉。（C）短暂性右侧CCA闭塞的手术步骤。1. 在分离出的右侧CCA下方放置两条预先剪好的缝线（#1和#2）。2. 打两个可松解的结。3. 使用缝线#3缝合切口。确保缝线#1和#2的线头可从切口外触及。4. 从切口外小心牵拉.......

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
成年雄性小鼠	Charles River	C57BL/6	10~13 周龄（22~30 g）
便携式实验动物麻醉系统	VetEquip	901807	麻醉
医用空气（压缩）气罐	Airgas	UN1002	麻醉
异氟烷	Piramal Healthcare	NDC 66794-013-25	麻醉
多站式实验动物麻醉系统	Surgivet	V703501	低氧系统
7.5% O₂ 与 92.5% N₂ 混合气罐	Airgas	UN1956	低氧系统
带加热灯的温度控制器	Cole Parmer	EW-89000-10	温度控制器
直肠探针	Cole Parmer	NCI-00141PG	温度控制器
体视显微镜	Olympus	SZ40	手术装置
带加热垫的热泵	Gaymar	TP700	手术装置
精细弯头镊子（带齿）	FST	11370-31	手术器械
精细弯头镊子（无齿）	FST	11373-12	手术器械
显微剪刀	FST	15000-03	手术器械
显微持针器	FST	12060-01	手术器械
哈尔斯泰德-蚊式止血钳	FST	13008-12	手术器械
5-0 丝线缝合线	Harvard Apparatus	624143	手术耗材
4-0 尼龙单股缝合线	LOOK	766B	手术耗材
组织胶	Abbott Laboratories	NC9855218	手术耗材
Puralube Vet 软膏	Fisher	NC0138063	预防眼部干燥