小鼠脑组织的下游分析处理

摘要

来源：Wager-Miller, J. 等。 用于后续分析的冻存啮齿类动物脑区采集。J. Vis. Exp (2020)

本视频演示了制备小鼠冷冻脑组织切片以用于下游分析的详细逐步操作流程。

方案

所有涉及动物样本的操作均已经过适当的动物伦理审查委员会审核并批准。

1. 脑组织的保存

1. 采用常规方法迅速取出约30 g重的成年CD1野生型小鼠（经安乐死后）的脑组织，并将其在液氮或经干冰预冷的异戊烷中快速冷冻60秒。
2. 将冷冻脑组织用铝箔包裹或置于锥形管中，于-80 °C保存，直至使用。

2. 制备脑组织基质

1. 在解剖组织前24小时，将一个干净的脑切片模具放置在一堆已解冻的冷冻包上。用两个冷冻包夹住模具两侧，确保刀片槽底部与凝胶包顶部之间留出约0.5 cm的距离（图1A）。在两端覆盖铝箔以增强冷却效果。
   注意：购买脑切片模具时，应选择足够大、能够完全容纳待解剖脑组织体积的型号。
2. 将装有脑切片模具和冷冻包的盒子放入-20 °C冰箱中，盒盖略微打开，过夜冷冻。

3. 设置冷冻玻璃板

注意：此步骤的目的是制备一个冷冻表面，用于切取....

结果

图1：准备冷冻工作表面。（A）将脑组织块置于隔热箱内的一叠冰袋上，并在其上下再各夹一层冰袋。在组织块两端包裹铝箔，以在切片过程中促进冷却。将盒子在 -20 °C 下过夜预冷。（B）选择一块与隔热箱开口尺寸相匹配的玻璃板，可用运输箱作为替代。向箱内加入冰块，直至距顶部约 5 cm 处。将箱子在 -20 °C 下过夜冷冻。（B, C）在收集组织前，先在冰面上均匀铺上一层约 2.5 cm 厚的干冰。在干冰上覆盖一张黑色塑料片（便于观察），然后放上玻璃板。将干冰置于箱子的远端角落，以冷却玻璃板上方的空气。工具可通过放置在玻璃板上或短暂接触干冰进行冷却。（D<.......

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
0.5 mm 小鼠冠状脑切片模具	Braintree Scientific	BS-SS 505C	切片块
0.5 mm 大鼠冠状脑切片模具	Braintree Scientific	BS-SS 705C	切片块
1.0 mm 带推杆活检打孔器	Electron Microscopy Sciences	69031-01
1.5 mL 微量离心管	Dot Scientific	229443	用于储存冷冻的感兴趣区域（ROIs）
1.5 mm 带推杆活检打孔器	Electron Microscopy Sciences	69031-02
2.0 mm 带推杆活检打孔器	Electron Microscopy Sciences	69031-03
4-12% NuPage 凝胶	Invitrogen	NPO323BOX	蛋白梯度凝胶
Bioanalyzer 系统	Agilent	2100	RNA 分析系统
Dounce 组织研磨器	Millipore Sigma	D8938	玻璃组织匀浆器
Fiber-Lite	Dolan-Jenner Industries Inc.	Model 180	冷光源灯
玻璃板	LabRepCo	11074010
低剖面刀片	Sakura Finetek USA Inc.	4689