通过重物坠落致伤法在小鼠模型中诱导创伤后癫痫发作的技术

摘要

来源：Shandra, O. 等，在重复性弥散性创伤性脑损伤小鼠模型中诱导创伤后癫痫。J. Vis. Exp. (2020)

方案

所有涉及动物模型的操作均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 体重下落实验步骤

1. 将小鼠放入诱导室中，调节氧气和真空流速为1 L/min，异氟烷气体浓度为3%−5%，麻醉小鼠5分钟。
2. 将小鼠从诱导室中取出，置于泡沫垫上，通过脚趾或尾部夹捏测试其是否无反应。
3. 皮下注射镇痛剂（0.1 mg/kg布托啡诺）。若同日进行脑电图（EEG）手术，则皮下联合注射布托啡诺与非甾体类抗炎药卡洛芬（5 mg/kg）。
4. 在最后一次撞击前或后，按每克体重3 µL剂量皮下注射乳酸钠溶液。乳酸钠溶液可与镇痛剂混合，以便通过单次注射快速给药。
   注意：乳酸钠溶液包含氯化钠、氯化钾、氯化钙和乳酸钠的水溶液混合物。此步骤有助于补充体液和电解质，促进恢复。
5. 将小鼠头部置于落锤管下方（图1A），并在头部中央、眼线与耳线之间放置一个平底不锈钢圆盘（直径1.3 cm，厚度1 mm，重量880 mg）。
   注意：该圆盘可将冲击力分散至颅骨表面（图1B）。
6. 拔出落锤管中的插销，使100 g重锤从50 cm高度自由下落。对于对照组小鼠的假损伤操作，应将重锤从管中取出，以防止插销意外释放导致落锤撞击。
   注意：小鼠头部必须保持水平，以确保重锤在整个圆盘表面自由下落。
7. 将失去意识的小鼠仰卧于加热垫上进行恢复，加热垫表面覆盖无菌聚乙烯衬里吸水毛巾。可通过测量翻正反射恢复时间（即小鼠从仰卧位自行翻转过来所需的时间）作为其无意识状态持续时间的指标。

结果

图1：重复性弥散性创伤性脑损伤（TBI）小鼠模型。（A）落锤装置。（a1）落锤导管。（a2）一根100 g重的落锤杆。（a3）用于固定落锤杆的插销。（a4）用于提升落锤杆的绳索，以便调节高度或从落锤导管中取出落锤杆。（a5）放置动物的泡沫垫，位于落锤导管正下方。（B）落锤操作流程。（b1）将不锈钢圆盘置于动物头部正中，位置在两眼与两耳连线的交点处。（b2 和

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
丁丙诺啡	Par Pharmaceuticals, Cos. Inc., Spring Valley, NY, USA	60969
C57BL/6 小鼠	Harlan/Envigo Laboratories Inc		雄性，12–16 周龄
C57BL/6 小鼠	The Jackson Laboratory		雄性，12–16 周龄
卡洛芬	Zoetis Services LLC, Parsippany, NJ, USA	26357	注意：仅在同一天进行立体定位电极植入时，才在体重下落过程中添加该药物
吸入麻醉用氟烷液体	MWI Veterinary Supply Co., USA	502017
不锈钢圆盘			定制
无菌带衬垫吸水毛巾垫	Cardinal Health, USA	3520