用于模拟阿尔茨海默病的β-淀粉样蛋白释放型聚合物微球的制备

摘要

来源：Almari, B.， 等. 用于阿尔茨海默病建模的淀粉样蛋白β分泌型海藻酸盐微球的制备。 J. Vis. Exp. (2019)。

本视频演示了一种制备包封分泌神经毒性β-淀粉样蛋白细胞的聚合物微珠的方法。将细胞-聚合物悬浮液通过微珠制备装置处理，通过钙离子交联实现聚合物凝胶化，从而在细胞周围形成球形微珠。该聚合物可支持细胞增殖，同时允许可控且长期地释放β-淀粉样蛋白，模拟其在阿尔茨海默病中的累积过程。

方案

1. 准备工作

1. 配制 100 mL 约 4% (w/v) 的海藻酸钠储备溶液。
   1. 称取 4.4 g 海藻酸钠，将干燥粉末加入 100 mL HEPES 缓冲盐水（HBS，含 20 mM 羟乙基哌嗪乙磺酸 [HEPES]（0.477 g）和 150 mM NaCl（0.877 g）的去离子水溶液）中，使其充分水合。
   2. 使用磁力搅拌器，转速约为 500 转/分钟（rpm），加热至 50 °C，以确保海藻酸钠完全水合。
      注意： 海藻酸钠可能需要一至两小时才能完全水合。为节省时间，可在包封实验前一天配制海藻酸钠溶液，并于 4 °C 保存至次日使用。若溶液已冷藏，请在使用前将其置于水浴或加热板上温和加热至 37 °C，并立即用磁力搅拌器搅拌。
   3. 使用 0.22 µm 孔径的聚醚砜（PES）滤器对海藻酸钠溶液进行无菌过滤。建议在 37 °C 下过滤，以利于溶液顺利通过滤膜。若温度下降，溶液黏度将升高，影响过滤效果。
2. 配制 1,000 mL 的 0.5 M CaCl₂ 溶液。
   1. 称取 55.49 g 无水 CaCl₂，溶于 1,000 mL HBS 溶液（含 20 mM HEPES 和 150 mM NaCl 的 1,000 mL 去离子水溶液）中。
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材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
0.22 µm PES 滤膜	Merck, UK	SLGP033RS
15 mm Netwell 插入式培养皿，74 µm 网格滤膜	Constar, usa	#3477
来自褐藻的海藻酸钠	Sigma-Aldrich,uk	A0682
氯化钙	Sigma-Aldrich,uk	C1016
CellTiter96 AQueous One 溶液细胞增殖检测试剂盒	Promega, USA	G3580
包囊仪	Inotech	IE-50	序列号 05.002.01-2005
HEPES	Sigma-Aldrich,uk	H4024
磷酸盐缓冲液	Sigma-Aldrich,uk	D1408
氯化钠	Sigma-Aldrich,uk	433209
柠檬酸三钠二水合物	Sigma-Aldrich,uk	W302600-K
胰蛋白酶-EDTA 溶液	Sigma-Aldrich,uk	T4049