评估连续药物输注到小鼠大脑对外周血糖水平的影响

摘要

资料来源：Ajoy， R.， et.al 的通过连续药物输注系统研究下丘脑胰岛素信号到外周葡萄糖耐量不良。J. Vis. Exp. （2018）

该视频演示了将药物连续输注到小鼠大脑中对血糖水平的影响。通过从禁食的小鼠尾巴收集血液并测量口服葡萄糖给药前后的葡萄糖水平来评估葡萄糖代谢。通过在小鼠中注射胰岛素来评估胰岛素耐量，并在特定时间间隔记录葡萄糖水平。

方案

所有涉及动物模型的程序均已由当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会审查。

1. 微渗透泵输液系统的制备

注意：在无菌条件下使用用 0.2 μm 过滤器过滤的缓冲液准备泵、人工脑脊液 （aCSF） 缓冲液和药物（Met-CCL5/RANTES 蛋白溶液（10 ng/mL，在 aCSF 中）），并在培养罩下戴手套进行所有程序。手术程序如下：

1. 手术前一天准备微渗透泵：使用套件随附的 1 mL 注射器和钝头针头，用人工脑脊液 （aCSF） 填充脑微渗透泵。将微渗泵浸入 aCSF 中，并将其放在摇床上轻轻摇动过夜><。 注意：泵应填充 aCSF，并且应避免泵内出现气泡（图 1A）。
2. 在开始手术之前，准备用于实验的重组 Met-CCL5/RANTES 蛋白溶液（10 ng/mL，在 aCSF 中稀释）。从泵中取出 aCSF，然后慢慢向泵中注入药物溶液，直到过量泄漏。
   注意：15 mL aCSF 或 Met-CCL5/RANTES 溶液足以泵 5-8 次。
   注意：重复该过程以确保泵完全充满药物，内部没有气泡。
3. 将导管剪成所需长度，并将它们连接到脑输液套件的钝端脑....

结果

图 1.小鼠渗透泵制备和植入外科手术。（A）脑输液试剂盒和泵制剂灌注药物溶液。红色箭头表示导管管中装满了液体。（B）将鼠标头固定并安装到立体定向装置上。（C）将皮肤最外层与皮下皮肤分开，用于植入微渗泵脑输液器;虚线表示渗透泵植入物的位置。（D）箭头表示输液侧。（E）在颅骨上的标记区域周围钻一个孔。（F）将渗透泵-脑输液装置放入鼠标背面，然后将脑输液针插入钻孔（虚线圆圈）。（G）使用纸巾胶粘剂将针头固定在颅骨上，然后拆下针头的顶部（剪刀指向 G），如 （H 所示）。（我

材料