靶向多巴胺神经元的小鼠脑组织切片免疫组化

摘要

资料来源：Kummari， E.， et.al.， 激光捕获显微解剖 - 单个多巴胺神经元和整个腹侧被盖区分离的演示.， J. vs. exp. （2015）

在本视频中，我们演示了脑组织切片中多巴胺神经元的免疫组织化学方案，用于随后的激光捕获显微解剖。

方案

所有涉及动物样本的程序均已由适当的动物伦理审查委员会审查和批准。

1.载玻片和组织的制备

1. 使用硅烷制备载玻片或聚环烷酸乙二醇酯 （PEN） 膜载玻片。
2. 对于 RNA 分离，将玻片浸入 RNase 去污溶液中，用不含 RNase 的水洗涤 3 次，然后用一系列分级的不含 RNase 的乙醇脱水并真空干燥 30 分钟。
3. 使用低温恒温器以 10 μm 的厚度切割组织切片，并安装在准备好的无 RNase 载玻片上。切片过程中保持切片冷冻以保持 RNA 质量。注意：确保组织距离载玻片边缘约 4 mm，因为 LCM 无法去除太靠近载玻片边缘的组织。为了从 PEN 膜载玻片中取出组织，请确保组织距载玻片左侧、顶部和底部 4 毫米，距载玻片右侧 7 毫米，这是未连接到载玻片的膜的尺寸。
4. 对于使用直接免疫组织化学分离单个细胞群，将组织切片到硅烷制备载玻片或 PEN 膜载玻片上。对于使用间接免疫组织化学引导技术分离组织区域，将一组切片安装在用于免疫组织化学的硅烷制备载玻片上，将替代切片安装在 PEN 膜载玻片和/或硅烷制备载玻片上用于 LCM。

2. 激光捕获的组织制备 – 用于直接激光捕获免疫反应细胞的快速酪氨酸羟化酶免疫组织化学

1. 用疏水笔勾勒组织轮廓并晾干。
将
2. 组织固定在 -20 °C 的丙酮-甲醇 （1：1） 溶液中 10 分钟。

材料