通过眶下神经缩窄术在大鼠模型中诱导神经病理性疼痛

摘要

来源：Deseure, K., 等. 通过大鼠眶下神经慢性缩窄性损伤（IoN-CCI）研究三叉神经病理性疼痛。J. Vis. Exp. (2015)。

本视频展示了一种通过结扎眶下神经在大鼠模型中诱导神经病理性疼痛的方法。在暴露眶下神经并结扎使其受压后，损伤部位的免疫反应增强邻近神经元的兴奋性，从而向大脑传递疼痛信号。

方案

所有涉及动物模型的操作均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 受试者

1. 使用雄性Sprague-Dawley大鼠（到达时体重250-300 g）。
2. 将大鼠饲养在实底笼具中，置于湿度为40-60%、室温（RT）为21 ± 1 °C的动物饲养室。
3. 自由提供饮水和饲料。
4. 维持12:12小时颠倒的明暗循环（光照开启时间为20时）。

2. 手术

1. 每只大鼠准备两根约6 cm长的5-0铬制肠线结扎线，置于无菌生理盐水中，以防干燥变硬变脆。
2. 用戊巴比妥（60 mg/kg，腹腔注射[i.p.]）麻醉动物，并给予阿托品（0.1 mg/kg，i.p.）。通过伸展一只后肢，用指甲捏压脚趾间的蹼状皮肤以评估麻醉深度，确保施加足够的压力，观察动物是否出现肢体屈曲反应。若动物发生屈曲，则需追加戊巴比妥。
3. 剃除大鼠头部的毛发，以便在两眼中心前后等距处沿正中线做一条长约25 mm的头皮切口。
4. 将大鼠头部固定于立体定位仪或其他头部固定装置中。将大鼠置于加热垫上以维持体温。
5. 在双眼上涂抹眼膏以防止干燥造成损伤。
6. 用酒精擦拭剃好的头部区域，然后使用聚维酮碘。
7. 在颅顶正中做一切口，暴露颅骨和鼻骨。
8. 使用手术显微镜执行步骤 2.9 至 2.16。
9. 使用棉签和一对Dumont镊子游离由上颌骨、额骨、泪骨和颧骨构成的眼眶边缘。用棉签吸除可能流出的血液。
10. 为暴露眶下神经（IoN），使用精密棉签轻轻推移眶内内容物，注意避免过度牵拉走行于IoN上方的前筛神经。用精密棉签和Dumont镊子以分离动作将IoN从周围结缔组织中游离出来。使用棉签吸除可能出血处的血液。
11. 进行结扎时，将一段铬制肠线的一端沿额骨向下推送，位于眶上神经（IoN）内侧，并平行于IoN向下方推进数毫米。此时结扎线位于眶上神经与额骨之间并保持固定位置。
12. 将45度角弯曲的Dumont镊尖滑入眶下神经（IoN）下方，使其靠近结扎线。轻轻向外侧牵拉眶下神经，暴露结扎线及镊尖。用镊子夹住结扎线，随后将镊子从眶下神经下方向外侧撤出。
13. 从眼眶腔中拉出结扎线，直至结扎线的两端距眶下神经（IoN）的距离大致相等。
14. 用结扎线的两端打一个“滑结”，以便精确控制缩窄程度，并将结滑至眶下神经（IoN）处。进一步滑动结扎线以缩窄 IoN，使神经直径略微减小，减小程度以刚好可察觉为宜。在滑结之上打一个常规结，以保持缩窄程度恒定（即., 以防止滑结松脱）。
15. 剪断结扎线，使结的两端留出约 2 mm 的自由端。
16. 重复相同的步骤（2.11 至 2.15），在距离第一个连接位点 2 mm 处进行第二次连接。
17. 假手术组请执行步骤 2.2 至 2.10。
18. 使用聚酯缝合线（4-0）缝合头皮切口，并将大鼠置于加热垫上使其恢复。在动物恢复足够意识以维持胸卧位之前，不得离开无人看管，且在完全恢复前不得将其放回与其他动物同笼饲养。
19. 为避免对神经病理性疼痛的发展产生预先镇痛效应，术后疼痛不应给予镇痛治疗。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
铬制肠线	Dynek	CG504
戊巴比妥钠（Nembutal）	Pharmacy
阿托品	Pharmacy
小型动物用剪毛器 - Favorita II	Aesculap	GT104
立体定位仪	Stoelting	51600
眼科软膏（Liposic）	Pharmacy
恒温监测系统	Harvard Apparatus	PY8 50-7221-F
棉签	Pharmacy
精密棉签	Qosina	10225
手术显微镜	Kaps	SOM 62
Dumont #5 镊子	Fine Science Tools	11251-10
Dumont 镊子 - 微钝头尖端 (#5/45)	Fine Science Tools	11253-25
剪刀 - 钝头尖端	Fine Science Tools	14574-09
聚酯缝合线 - Mersilene（4-0）	Ethicon	R871H