来源：Wulf, M., 等. 基于激光显微切割的神经黑色素颗粒蛋白质组谱LC-MS/MS分析方案. J. Vis. Exp. (2021).
本视频演示了对从人死后脑组织中分离的神经黑色素颗粒（NMGs）提取的肽样品进行分析的方法。首先使用高效液相色谱法（HPLC）分离肽，然后通过质谱分析其质荷比（m/z）。对目标肽段进行碎裂以鉴定翻译后修饰，并将所得数据与参考数据库进行比对，从而确定NMGs的蛋白质组学特征。
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方法文章
人脑组织中分离的神经黑色素颗粒蛋白质组学谱的LC-MS/MS分析
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2025年4月28日
本文内容
摘要
方案
1. 胰蛋白酶消化
1. 在冰上解冻样品。
2. 使用真空浓缩仪将样品完全干燥。
3. 用50 μL 适宜的消化缓冲液（例如50 mM 碳酸氢铵）重悬样品。
4. 加入1.25 μL 200 mM 1,4-二硫苏糖醇后，将样品在60 °C、300 rpm条件下于恒温混匀仪中孵育30分钟，随后冷却至室温（RT）。
5. 加入1.36 μL 0.55 M 碘乙酰胺后，在室温避光条件下....
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结果
图1：120分钟DDA测量的总离子流图（TIC）。 色谱图显示了在0到约105分钟的保留时间范围内，对应于洗脱肽段的离子相对丰度。当主色谱柱在105分钟时进行冲洗th
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材料
| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| 1,4-二硫苏糖醇 | AppliChem | A1101 | |
| 乙腈 | 默克 | 1.00029.2500 | |
| 碳酸氢铵 | Sigma-Aldrich | A6141 | |
| 甲酸 | Sigma-Aldrich | 56302 | |
| 碘乙酰胺 | AppliChem | A1666,0100 | |
| 微型离心管 500 | 卡尔·蔡司 | 415190-9221-000 | |
| Orbitrap Fusion Lumos Tribrid 质谱仪 | 赛默飞世尔科技 | IQLAAEGAAPFADBMBHQ | |
| PALM 微束系统 | Zeiss | 494800-0014-000 | |
| 三氟乙酸 | 默克 | 91707 | |
| 胰蛋白酶，测序级 | Serva | 37283.01 | |
| Ultimate 3000 RSLC nano 液相色谱系统 | 赛默飞世尔科技 | ULTIM3000RSLCNANO | |
| 软件名称 | 链接/公司 | 版本 | |
| FreeStyle | 赛默飞世尔科技 | 1.6 | |
| MaxQuant | https://www.maxquant.org/ | 1.6.17.0 | |
| PALMRobo | Zeiss | 4.6 pro | |
| Perseus | https://www.maxquant.org/perseus/ | 1.6.15.0 | |
| Skyline | https://skyline.ms/project/home/software/Skyline/begin.view | 20.2.0.343 | |
| XCalibur | 赛默飞世尔科技 | 4.3 |
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