使用 Translaminar Autonomous System 开发跨层压力模型

Abstract

资料来源：Sharma， T. P.， et al.， 用于调节人类供体后段眼内压和颅内压的跨层自主系统模型。J. Vis. Exp. （2020 年）。

本视频演示了通过模拟跨板自主系统中的眼内压和颅内压来准备人眼研究跨层压力对视网膜神经节细胞信号传导影响的过程。

Protocol

所有涉及样本采集的程序均已按照研究所的 IRB 指南执行。

1. 设备和用品

1. 的准备和消毒请参阅材料表，了解所需用品的完整列表以及供应商和目录号。
2. 使用前，通过高压灭菌或使用环氧乙烷安瓿瓶对所有设备和器械进行消毒。

2. 灌注培养基

1. 的制备加入 1% 青霉素-链霉素（10,000 U/mL 青霉素、10,000 μg/mL 链霉素，溶于 0.85% NaCl 中）和 1% L-谷氨酰胺 （200 mM） 至 1,000 mL 高葡萄糖 Dulbecco 改良 Eagle 培养基 （DMEM） 中。
2. 通过 0.22 μm 过滤器对灌注培养基进行消毒。

3. 跨层自主系统 （TAS） 设置

1. 设置流入注射器（眼压 （IOP） 和颅内压 （ICP） 储液器）。
   1. 将 30 mL 灌注培养基（第 2 部分）添加到 30 mL 注射器中。将 3 通旋塞阀连接到 30 mL 注射器上。将 0.22 μm 亲水过滤器连接到 3 通旋塞阀。将 15 G 鲁尔短截线适配器连接到 0.22 μm 亲水过滤器。
   2. 从注射器设置中去除气泡。将管路连接到 15 G 鲁尔接头。用不通风的通用锁盖关闭旋塞阀的侧端口。重复总共两个设置。
   3. 将一个注射器标记为通道 1 颅内压 （CH1 ICP），将另一个注射器标记为通道 2 眼压 （CH2 IOP）。
2. 设置流出注射器（IOP 和 ICP 储液器）。
   1. 将三通旋塞阀连接到 30 mL 注射器上。将 15 G 鲁尔短线适配器连接到 3 通旋塞阀。将管路连接到 15 G 鲁尔接头。
   2. 用不通风的通用锁盖关闭旋塞阀的侧端口。重复总共两个设置。将一个注射器标记为 CH1 ICP，另一个注射器标记为 CH2 IOP。

4. 准备人类全眼球

注意：如果接收到全眼，请按照以下步骤将眼前段与眼后段分开。如果眼睛被一分为二，请从步骤 4.4 开始。

1. 将一只眼睛放入聚维酮碘溶液中 2 分钟。
2. 用无菌磷酸盐缓冲溶液 （PBS） 冲洗眼睛以去除聚维酮碘。重复两次。
3. 用镊子和剪刀从整个眼球上去除附件。在赤道处将眼睛一分为二，以分离眼睛的前段和后段。
4. 移除视神经鞘。去除眼后段的玻璃体液。
5. 如果需要，从后段修剪额外的巩膜，以确保与 IOP（底部）腔室的圆顶良好贴合。使用镊子，确保视网膜均匀分布在节段的后部。
6. IOP（底部）腔室设置
   1. 将人体后段放入圆形圆顶上方的 TAS 的 IOP（底部）腔室中，视神经朝向顶部。
   2. 使用带有四个螺钉的环氧树脂 O 形圈密封后段，确保紧密密封。
   3. 将管路插入 IOP（底部）腔室的 IN 和 OUT 端口。将带含填料管路的 IOP 流入注射器插入 IN 端口，将带管路的空 IOP 流出注射器插入 OUT 端口。
   4. 使用推/拉方法将灌注介质缓慢注入流入口以填充后眼罩，同时通过流出注射器缓慢拉出灌注介质，以去除管路中的任何气泡。一旦 IN 和 OUT 管都没有气泡，就停止注入培养基。
   5. 将旋塞阀锁定在关闭位置。从 IOP IN 端口过滤器组件中取出 30 mL 注射器，然后重新填充 30 mL 培养基。然后，用过滤器组件更换注射器。
7. ICP（顶部）腔室设置
   1. 将 ICP（顶部）腔室/盖子放在后段的背面。确保视神经位于上腔内。用四个螺钉密封顶部腔室。
   2. 将管路插入 ICP（顶部）室的 IN 和 OUT 端口。将带管路的 ICP 流入注射器插入 IN 端口，将带管路的空 ICP 流出注射器插入 OUT 端口。
   3. 轻轻缓慢地将介质注入 IN 端口，以填充 ICP 室并使用推/拉方法去除管路上的气泡。一旦 ICP 室以及 IN 和 OUT 管路均无气泡，请停止注入培养基。
   4. 将旋塞阀锁定在关闭位置。从 ICP 端口过滤器组件中取出 30 mL 注射器，然后重新填充 30 mL 培养基。然后，用过滤器组件更换注射器。

Materials