诱导大鼠模型中眼内压升高

摘要

来源：Lani-Louzada, R.，等，通过全周烧灼角膜缘血管丛建立手术诱导型青光眼的啮齿类动物模型。视觉化实验杂志（2022）

本视频展示了在大鼠模型中诱导并监测眼内压（IOP）升高的方法。该过程包括烧灼角膜缘血管，导致血管闭塞和眼内压升高。随后让大鼠恢复，并定期监测实验眼和对照眼的眼内压，以进行比较。

方案

所有涉及动物模型的操作均已通过当地机构动物护理委员会和JoVE兽医审查委员会的审核。

本研究中使用了两种性别的Lister Hooded大鼠，年龄为2-3个月，体重为180-320 g。然而，该操作步骤可根据不同品系及不同年龄范围的大鼠进行适当调整。

眼压升高手术及临床随访

1. 在受控温度环境及12小时光照/黑暗循环（上午6点开灯/下午6点关灯）条件下饲养实验动物，提供标准颗粒状γ射线辐照饲料（Nuvilab® CR-1, Quimtia S/A, 巴西）和经过三重过滤（含无毒活性炭）的饮水 随意摄取.
2. 配制一种麻醉剂储备混合液，由三份10%盐酸氯胺酮和一份2%盐酸赛拉嗪（稀释剂：无菌水）组成。
3. 轻轻抓住动物背部皮肤以固定，通过腹腔注射给予每克体重1 µL的麻醉混合物（氯胺酮：75 mg/kg；赛拉嗪：5 mg/kg）以诱导麻醉。约5分钟后通过脚趾夹捏反应检查麻醉效果。
4. 使用0.5%盐酸丙美卡因滴眼液对双眼表面进行局部麻醉。等待30-60秒后，用无菌小棉签轻轻接触鼻侧或外侧球结膜，清除眼球前部残留的溶液。
5. 将动物置于实验台面上的仰卧位，使其角膜表面易于接触眼压计探头，测量实验眼及对侧对照眼的基础眼压。
6. 使用压平式或回弹式手持眼压计（图1A将眼压计探头置于中央角膜区，使其轻微垂直接触角膜表面。获取3-5次可靠的仪器自动生成的平均值。每次平均值由设备在成功完成六次单独测量后自动计算得出。
   1. 将回弹式眼压计装入探针，将设备尖端朝上放置以防止探针脱落，然后按一次测量按钮开机。开机后，显示屏将显示 00 表明设备已准备就绪，可以进行测量。
   2. 将设备置于探头尖端距离角膜1-4 mm处，快速而小心地按下测量按钮进行测量，期间保持设备不动。每次成功测量均会发出短促的蜂鸣声提示，完成六次测量后，设备屏幕将显示平均值。
      注意： 尽管使用压平式眼压计已有长期经验，但作者建议采用回弹式眼压计以优化整个操作流程，因其更易于获得可靠的眼内压测量值。
7. 将动物置于体视显微镜下，呈轻度侧卧位，在40倍放大下观察实验眼，仔细规划手术方案。操作过程中切勿忘记通过滴加羧甲基纤维素钠或透明质酸钠滴眼液，保持对侧对照眼的湿润。
8. 借助弯头镊子，轻柔地向前推动实验眼球，以暴露围绕角膜缘360°的血管网络。另一只手持低温眼科电凝器（1,300 °F；Bovie Medical, USA），轻柔地沿角膜周围对血管进行电凝图1B-E).
   注意： 所述电灼器具有圆形尖端，应纵向接触角膜缘血管。
9. 注意避免烧灼角膜周边部，因为这可能导致术后角膜混浊，从而妨碍后续观察或治疗 体内 视网膜功能评估
10. 观察手术眼巩膜缘出现的小圆形烧灼痕迹、角膜缘血管闭塞以及瞳孔散大，这些是手术成功的征象。
    注意： 由于大鼠和小鼠的角膜缘血管系统在解剖结构上相似，且所使用的烧灼器具有轻巧的小型尖端，因此本方案无需任何调整即可适用于小鼠眼睛。
11. 术后检查双眼的眼压，方法如步骤1.5所述。
12. 滴加一滴眼用醋酸泼尼松龙（1.2 mg/mL），使其与实验眼的前表面接触约40秒，随后替换为抗生素眼膏（盐酸土霉素30 mg/g加多粘菌素B 10,000 U/g；或环丙沙星3.5 mg/g）。术后通过肌肉注射盐酸曲马多（单次剂量；2 mg/kg）以预防疼痛。

结果

图1：角膜缘血管丛的热凝固及其对视网膜功能的体内影响in vivo。（A）测量大鼠眼内压（IOP）的替代方法：回弹式眼压计（上方）和压平式眼压计（下方）。（B–E）手术过程；箭头：角膜缘血管丛；箭头：用于暴露眼球前表面并优化对角膜缘血管评估的弯镊；井号：低温眼科电凝器的圆形尖端；星号：电凝标记。比例尺：2 mm。（D）插图为角膜缘血管结构的更高倍放大图像，显示待电凝的血管。（F）高眼压（OHT，红色）和对照组（黑色）眼的眼内压...

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
低温精细电灼器 10/盒	Bovie Medical Corporation	AA00	低温眼科电灼器
Cetamin	Syntec do Brasil Ltda	000200-3-000003	盐酸氯胺酮 10%
Ecofilm	Cristália Produtos Químicos Farmacêuticos Ltda	MS-1.0298.0487	羧甲基纤维素钠 0.5%
Hyabak	União Química Farmacêutica Nacional S/A	MS-8042140002	透明质酸钠 0.15%
Icare Tonolab	Icare Finland Oy	TV02 (型号)	回弹式手持眼压计
Maxiflox	Cristália Produtos Químicos Farmacêuticos Ltda	MS-1.0298.0489	环丙沙星 3.5 mg/g
Ster MD	União Química Farmacêutica Nacional S/A	MS-1.0497.1287	醋酸泼尼松龙 0.12%
Terolac	Cristália Produtos Químicos Farmacêuticos Ltda	MS-1.0497.1286	酮咯酸氨丁三醇 0.5%
Terramicina	Laboratórios Pfizer Ltda	MS-1.0216.0024	盐酸土霉素 30 mg/g + 多粘菌素B 10,000 U/g
Tono-Pen XL	Reichert Technologies	230635	数字压平式手持眼压计
	Carl Zeiss	-	用于手术和视网膜解剖的体视显微镜