在小鼠模型中进行面神经压榨性轴切术

摘要

来源：Olmstead, D. N., 等，小鼠面神经轴突切断模型：研究运动神经元对损伤反应的方法。J. Vis. Exp. (2015)。

本视频演示了小鼠面神经 crush 手术，通过钝性分离关键解剖标志，暴露茎乳孔处的面神经主干。随后使用镊子压迫神经主干，造成轴突损伤并阻断神经信号传导。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医评审委员会的审核。

1. 手术入路

1. 将体视显微镜与手术区域对齐并调焦。调整鼻罩位置并用胶带固定，使其位于视野边缘。
2. 将小鼠侧卧于左侧，用胶带将右耳边缘固定至鼻罩，暴露耳后将要进行切口的区域。确保耳后静脉横向穿过耳部。需要注意，动物的正确体位及耳朵的妥善固定对于快速定位面神经至关重要。
3. 用70%乙醇润湿耳部及耳后毛发，然后使用剃刀或手术刀片剃除手术区域的毛发。预先润湿毛发可使该解剖位置的剃除操作更加容易。
4. 使用碘溶液（如聚维酮碘外科洗手液，7.5% 聚维酮碘）清洁皮肤，随后使用70%乙醇。重复该清洁步骤两次，以彻底消毒该区域。
5. 为确定切口位置，从耳部向尾侧追踪耳后静脉至耳突后方区域。使用弹簧剪在耳突后方2-3毫米处做一4毫米切口。
6. 使用钝性分离法分离皮下脂肪和筋膜。避免使用剪刀直接切割，以免损伤血管或肌肉组织。
7. 若发生出血，用无菌棉签对术区施加压力至少30秒。若出现明显液体流失，使用25或27号针头向小鼠腹腔注射最多0.5 ml无菌0.9%氯化钠溶液。
8. 利用几个关键解剖标志——副神经、耳道和前腹二腹肌（如下所述），定位面神经。沿这些解剖标志进行解剖，直至可视化面神经的分支。当面神经显露时，呈现为明显的白色实性结构，其表面有一层筋膜与深层结构相连。
   1. 找到副神经，该神经从颅骨尾侧发出，在皮下脂肪和筋膜解剖分离后，支配斜方肌。面神经位于副神经的深部。
   2. 找到位于面神经前方、呈珍珠白色且可见的软骨性耳道。
   3. 找到位于面神经上方且尾侧的前腹肌肌腹。
9. 当观察到面神经的主要分支时，沿其向后追踪，以确定其起源于茎乳孔。使用尖端精细的Dumont #5/45镊子夹住手术区域以保持切口开放，沿神经走行推进弹簧剪尖端，随后将镊子向后移动，以维持 newly advanced 区域的开放状态。
10. 在此处观察面神经主干及其颧支、颊支和下颌缘支。
    注意： 颞支将更靠近孔口处。下颌缘神经在接近下颌处分为上、下两部分，因此这些神经分支在此层面不可见。
    1. 若进行 crush 损伤操作，使用 Dumont #5/45 镊子以恒定压力压迫神经 30 秒，以完全切断所有轴突，随后在与第一次损伤部位垂直的第二角度重复一次 crush 操作。在 30 秒的压迫过程中应避免压力波动，否则将导致动物间损伤程度不一致。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
体视显微镜	Leica	M60
标签胶带	Fisher Scientific	15-952
Vannas-Tübingen 弹簧剪刀 - 直头/锐利/8.5 cm/5 mm 刃口	Fine Science Tools	15003-08	使用前需灭菌
Dumont #5/45 镊子 - 标准尖头/45° 弯角/Dumoxel/11 cm	Fine Science Tools	11251-35	使用前需灭菌
0.9% 氯化钠注射液，USP	Hospira	0409-4888-10
聚维酮碘，16 盎司，带分配器	Fisher Scientific	19-027132
70% 乙醇
玻璃珠灭菌器