在产前大鼠中诱导缺氧-缺血与炎症条件以建立脑病模型

摘要

来源：Jantzie, L. L.，等。利用产前缺氧缺血联合宫内注射脂多糖建立大鼠早产儿脑病模型。J. Vis. Exp. （2015）

本视频演示了一种通过限制子宫血流并注射LPS，在胎鼠中诱导缺氧缺血性和炎症性条件的实验方案，以模拟与早产研究相关的神经炎症和脑发育障碍。

方案

所有涉及动物模型的操作均已经过当地机构动物护理委员会以及 JoVE 兽医审查委员会审核。

1. 动脉瘤夹的放置

1. 在每侧子宫动脉上放置一个大鼠30 G动脉瘤夹。确保血流完全停止，包括近端和远端脉搏消失，以及子宫血管变暗，包括各个胎盘。用纱布覆盖暴露的子宫角和整个手术区域，并用无菌生理盐水冲洗。每约10分钟冲洗一次手术区域，以保持湿润。
2. 60分钟后，移除纱布并冲洗手术区域。确保子宫角和血管充分湿润，以便顺利取下夹子。使用镊子轻轻取下每个动脉瘤夹。操作时注意避免对血管造成损伤，并在取下过程中保持组织完整性。
3. 彻底冲洗子宫角和手术区域，注意清除羊膜囊中任何散落的纱布纤维。

2. 将脂多糖注射至羊膜囊中

1. 在每个独立羊膜囊的底部，胎盘板前方，向羊膜腔内注射含伊文思蓝染料的脂多糖（LPS）溶液100 µl（每囊4 µg）。使用钝头镊子固定并旋转每个羊膜囊，使其处于最佳注射位置。稀释的伊文思蓝染料作为对比剂，有助于确认注射针头位置正确及注射过程顺利。
   注意：羊膜腔内注射仅可使用带有8 mm、31 G针头的超细0.3 ml胰岛素注射器。使用较粗针头将导致持续性羊水流失、胎儿死亡以及妊娠组织被母体吸收。拔出注射器后若出现少量羊水渗漏，可通过直接压迫羊膜囊来减轻。部分大鼠胎儿可能耐受一定程度的羊水过少，但若因使用较粗针头穿刺或意外穿刺导致急性羊水大量丢失，进而引发持续性液体渗漏，则会导致胎儿丢失，严重时甚至累及邻近妊娠囊。
2. 用无菌生理盐水冲洗子宫角3次。

3. 关闭剖腹切口

1. 用镊子小心将子宫角复位至腹膜腔内。确保羊膜囊与正中切口之间有足够的空间，使用连续的3-0丝线缝合肌筋膜层边缘。缝合肌肉切口时，应注意羊膜囊的位置，避免将羊膜囊缝入或穿透。
2. 使用连续的3-0丝线缝合皮肤层，关闭皮肤切口。
   注意：剖腹手术切口应以两层连续缝线关闭，以适应妊娠进展过程中皮肤和肌肉的扩张。连续缝合可使伤口张力均匀分布。间断缝合不推荐，因其形成多个结，可能引起刺激，且大鼠在麻醉恢复后易啃咬这些线结。不推荐使用外科缝合钉。手术线结的线尾应剪至很短（<3 mm）。
3. 使用26 G针头在切口周围皮下注射1 ml 0.125%布比卡因。在颈背部皮下给予一次0.1 mg/kg的丁丙诺啡。
4. 关闭异氟烷，必要时用毛巾擦干大鼠。将大鼠置于清洁的饲养笼中，并监测其从麻醉中的恢复情况。确保大鼠不发生低体温。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
生理盐水溶液，0.9%	Sigma	S8776
LPS 011B4	Sigma	L2630
伊文思蓝染料	Sigma	E2129
外科手套	Biogel	40870
手术巾	Cardinal Health	287000-008	无菌
PDI 酒精消毒片	Fisherbrand	06-669-62
Mini Arco 可充电式剪毛器	Kent Scientific Corp.	CL8787
钝头镊子	Roboz	RS-8100
剪刀	Roboz	RS-6808
外科剪刀	Roboz	RS-5880
外科剪刀	F.S.T.	14002-16
注射器	BD	309628	1 ml
针头	BD	305122	25G 5/8
针头	BD	305128	30G 1
棉签	Fisherbrand	23-400-114	小型，6 英寸，无菌
棉质纱布海绵	Fisherbrand	22-362-178
持针器	Kent Scientific Corp.	INS600109	12.5 CM STR
血管夹	Kent Scientific Corp.	INS600120	30G 压力型
3-0 Perma Hand Silk 缝线	Ethicon	1684G	黑色编织，3-0（2 号），18 英寸，不可吸收，PS-1 24mm 针，3/8 圆弧
胰岛素注射器	BD	328438	0.3cc 3mm 31G