小鼠脑切片荧光原位杂交后神经元的免疫染色

摘要

来源：Baleriola, J., 等.，使用高分辨率原位杂交法检测脑切片中轴突定位的 mRNA。 J. Vis. Exp. (2015)

本视频展示了利用荧光原位杂交和抗体染色技术，在固定的小鼠海马脑片中检测胆碱能轴突内 mRNA 的方法。荧光显微镜可揭示探针标记的 mRNA 与胆碱能神经元中乙酰胆碱转移酶的空间定位。

方案

所有涉及动物样本的操作均已经过适当的动物伦理审查委员会审核并批准。

1. 荧光原位杂交实验联合免疫组织化学检测，采用热诱导抗原/RNA去封闭技术
   1. 开始之前，准备好所有所需材料：
      1. 将杂交炉预热至 40 ℃，并在炉内放置一个盛有蒸馏水的托盘，以创造湿润的环境。
      2. 取一个切片盒，在其中放入用蒸馏水浸湿的纸巾以增加湿度，然后将切片盒放入杂交炉中。
      3. 从冰箱中取出探针（包括阴性探针和目标探针），在....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
靶向小鼠 Atf4 mRNA（NM_009716）第 20-1381 位核苷酸的定制探针	Advanced Cell Diagnostics	-	探针
靶向人 ATF4 mRNA（NM_001675.2）第 15-1256 位核苷酸的定制探针	Advanced Cell Diagnostics	-	探针
阴性对照探针-DapB	Advanced Cell Diagnostics	310043	探针
阳性对照探针-小鼠 Polr2A（可选）	Advanced Cell Diagnostics	312471	探针
山羊多克隆抗-ChAT 抗体	Millipore	AB144P
含 DAPI 的 ProLong Gold 封片剂	Life Technologies	P36935
RNAscope 荧光多重检测试剂盒（用于荧光检测）	Advanced Cell Diagnostics	320850	原位杂交试剂盒