使用背根神经节注射和背根挤压损伤对大鼠的感觉轴突再生进行建模

所有涉及动物模型的程序均已由当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会审查。

1. 注射DRG并进行背根挤压伤

注：这是一项极其精细的手术。建议先在一些死去的动物身上练习，以熟悉解剖结构，然后再进行活体动物手术。

1. 找到皮肤上突出的 C2 和 T2 棘突。用 10 号手术刀刀片在 C2 和 T2 棘突之间做一个皮肤切口（一旦皮肤打开，第一层肌肉上应该可以看到白色的纤维组织中线;第一层肌有"果冻状"质地）。
2. 使用手术刀刀片沿白色中线在第一层肌肉上做一个类似大小的切口。不要越过突出的 T2 棘突，因为那里附近有一个来自降主动脉的主要动脉分支。
   注意： 从此步骤开始，任何地方都可能发生大量出血。始终使用消毒过的棉签或外科可吸收海绵止血并清除血液，以便始终清晰可见。"盲目"进行手术可能会对脊髓、DRG 或背根造成不必要的损伤，从而导致动物以后出现意想不到的不利影响。
3. 使用两个牵开器缩回第一层肌肉，一个位于前部，一个位于尾部;第二层肌有条纹外观，应该是可见的。
4. 找到第二层肌肉的中线（可以观察到两块纵向肌肉由薄的膜组织连接）。用一把微型剪刀解剖膜组织，将两块纵向肌肉分开。如果可能，请避免使用手术刀刀片，因为这可能会导致不必要的肌肉损伤和出血。
5. 相应地调整牵开器，露出覆盖脊柱的第三层薄肌肉。用一对镊子轻轻触摸第三层肌肉可以感觉到棘突。
6. 用显微剪刀在第三层肌肉上做一个小切口，然后用刮刀或手术刀轻轻地从骨头上刮下肌肉，以清楚地露出椎骨。如果需要，切掉一些肌肉或肌腱，使椎板切除术更容易。
7. 要暴露左侧 C5 - C8 DRG，请使用一对细咬合器小心地去除部分椎板和蒂，在 C4 - T1 椎骨上进行左半椎板切除术。DRG 位于椎骨横孔附近。
   注意：C3 - C7 椎骨没有明显的棘突。C5 DRG 位于 C4 和 C5 椎骨之间，C6 DRG 位于 C5 和 C6 椎骨之间，依此类推，而 C8 DRG 位于 C7 和 T1 椎骨之间。尽管存在 C8 DRG 和 C8 脊髓段，但没有 C8 椎骨。
8. 一旦暴露了足够的 DRG 以进行注射，将装有定制 33 号钝针的充满病毒的微升注射器放在立体定位注射器支架上，以准备注射器。注射前，使用 30 号斜面针在每个目标 DRG 上开一个小的浅表开口，以帮助插入注射针。
9. 轻轻转动旋钮以调整立体定位坐标，将 33 号针头插入 DRG 的中心。不要过度插入针头，因为这可能会导致液体从 DRG 的腹侧泄漏出来。如果发生泄漏，请立即调整针的位置。
   注意： 不使用数字立体坐标;但是，利用框架固定注射针头是有帮助的。
10. 使用输注注射泵以 0.2 μL/min 的速度将 1 μL 病毒注入每个 DRG 中。再等待 3 分钟，然后再拔出针头。在注射过程中，如果病毒溶液中含有有色染料，DRG 会慢慢变色。
11. 为了进行并发的 C5 - C8 背根挤压损伤，使用一对细尖镊子 （Bonn Micro） 将每个根压碎 3 次，每次 10 秒，与镊子的末端完全相对;组织中的白线应出现在挤压部位。不要用镊子深入超过要求的深度，因为这可能会对腹根造成损害。