构建脊髓损伤小鼠模型

摘要

来源：Kumar, S.，等. 脊髓损伤后压疮的小鼠模型。J. Vis. Exp. (2019)

本视频演示了在小鼠中诱导脊髓损伤的详细步骤。将麻醉后的小鼠进行解剖，暴露第9至第10胸椎（T9-T10），并去除其棘突。随后横断暴露的脊髓以造成损伤。手术区域缝合关闭后，让小鼠恢复。

方案

所有涉及动物模型的操作均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 手术与非手术器械的准备

1. 将手术和非手术器械在高压灭菌器中进行灭菌。
2. 用70%乙醇清洁手术操作台，并将加热垫预热至37 °C。
3. 将加热垫放置在手术台上，并覆盖无菌手术单。
   注意：所有存活手术操作中均采用“不接触”技术以维持无菌状态。

2. 动物准备及T9-T10脊髓椎板切除术的实施

1. 获取成年（Balb/c）10周龄雄性小鼠。使用吸入式麻醉器对每只动物进行麻醉，初始异氟烷浓度为5%，随后降低至2-3%以维持整个操作过程中的镇静状态。
2. 通过夹捏尾部或足掌以诱发伤害性刺激，确认动物无反应，表明麻醉完全。
3. 使用电动剃毛器剃除背部（从头至尾）的毛发，随后涂抹脱毛膏（3分钟）以去除残留毛发。最后用流动水或湿擦清洗背部，并将动物放回笼中。
   注意：此步骤旨在避免皮肤损伤时造成额外刺激或化学污染
4. 次日，于角膜涂抹眼用软膏，以防止手术过程中眼睛干燥。随后，使用聚维酮碘洗液和70%乙醇交替清洗皮肤三次。
5. 使用手术刀在背部T8-T12椎体水平沿中线做皮肤切口（约1.0-1.5 cm）。
   注意：椎体水平可通过从T13向后计数确定，T13椎体对应浮肋的位置。
6. 清除皮下脂肪组织以暴露椎旁肌肉，随后缓慢分离肌肉，暴露双侧棘突和椎板。
   注意：操作需极为谨慎，避免在此阶段引起过多出血或损伤脊髓。
7. 使用显微镊子轻轻剥离椎板，进行椎板切除术以暴露脊髓（T9-T10椎体）。
   注意：椎板切除应充分暴露脊髓，以便于建立损伤模型。在对照组中，仅执行椎板切除术。

3. 实施 T9-T10 完全性脊髓损伤（SCI）

1. 使用镊子固定T8节段的脊柱，并上提以加大脊柱的弯曲度。
2. 使用精细剪刀在T9和T10椎骨之间切断脊髓，直至椎管底部，以确保完全横断。
3. 在手术显微镜下确认完全横断后，在椎板切除部位覆盖一块皮下脂肪组织，以在关闭手术部位前为脊髓提供额外保护。
4. 最后，关闭切口，使用连续缝合法缝合椎旁肌肉和浅层筋膜，然后使用缝合夹关闭皮肤。
5. 脊髓损伤（SCI）术后，观察次日的肠道蠕动情况；但需通过手动排空膀胱来管理尿潴留问题。
   注意： 可在术后第2天开始，之后每周一次，使用Basso小鼠评分（Basso Mouse Scale, BMS）监测后肢功能恢复的进展情况。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
小鼠标准饮食	PMI Nutrition International, Brentwood, MO		标准饲料颗粒
异氟烷	HENRY SCHEIN Animal Health	SKU 029405
贝迪碘外科 scrub	HENRY SCHEIN Animal Health
眼用软膏	HENRY SCHEIN Animal Health	SKU 008897
NAIR 脱毛乳液	Church & Dwight Co., Inc. Princeton, NJ
ELOXIJECT（美洛昔康）注射液	HENRY SCHEIN Animal Health	SKU 049755	5 mg/mL, 10 mL
头孢唑林钠	HENRY SCHEIN Animal Health	SKU 054846	1 g, 10 mL 瓶
缓释布托啡诺	ZooPharm, Windsor, CO	-	-
0.9% 氯化钠注射液 USP	BRAUN, Irvine, CA	S8004-5384
BALB/C 雄性小鼠	Charles River Lab., Wilmington, MA	28
无菌棉签	Puritan, Guilford, ME	SKU#: 25-806
米歇尔缝合夹	Fine Science Tools (USA) Inc., Foster City, CA	12040-01
外科缝合线，U.S.P.	Henry Schein Animal Health	101-2636