脑肿瘤神经球切片中生物标志物的免疫组织化学染色

摘要

来源：Núñez, F. J., 等. 利用石蜡包埋的三维胶质瘤神经球培养物进行免疫组织化学评估胶质瘤生物标志物。 J. Vis. Exp. (2019)。

本视频演示了一种免疫组织化学技术，用于标记石蜡包埋的脑肿瘤神经球中的肿瘤生物标志物。神经球切片经过去除石蜡和再水化处理后，进行抗原修复以暴露生物标志物位点。随后依次应用一抗和二抗以标记这些生物标志物。二抗与亲和素偶联的过氧化物酶结合，后者氧化显色底物以显示生物标志物的位置。最后，进行细胞核复染和玻片封片，以供显微镜下分析。

方案

1. 石蜡包埋神经球（NS）的免疫组织化学（IHC）

1. 将切片置于金属架中，在60 °C下孵育20分钟，以熔化石蜡。
2. 在室温（RT）下将切片放入再水化试剂盒中进行脱蜡：二甲苯中孵育3次，每次5分钟；100%乙醇中孵育2次，每次2分钟；95%乙醇中孵育2次，每次2分钟；70%乙醇中孵育1次，每次2分钟；去离子水中孵育1次，每次2分钟。此后，将切片保持在自来水中直至抗原修复步骤，因为干燥会导致非特异性抗体结合。
3. 将切片在柠檬酸缓冲液（10 mM柠檬酸，0.05%非离子型去污剂，pH 6）中于125 °C孵育30秒，随后在90 °C孵育10秒。待其冷却后，用蒸馏水冲洗切片5次。
4. 在室温下将切片置于0.3% H₂O₂中孵育30分钟。....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
兔多克隆抗ATRX抗体	Santa Cruz Biotechnology	sc-15408	免疫组化，1:250稀释
兔多克隆抗Ki-67抗体	Abcam	Ab15580	免疫组化，1:1000稀释
兔多克隆抗OLIG2抗体	Millipore	AB9610	免疫组化，1:500稀释
山羊多克隆抗兔生物素标记二抗	Dako	E0432	免疫组化，1:1000稀释
Vectastain Elite ABC HRP试剂盒	Vector Laboratories Inc	PK-6100
BETAZOID DAB显色试剂盒	Biocare Medical	BDB2004 L/价格截至12/18