使用荧光寿命成像显微镜分析组织切片中的淀粉样蛋白结构

Abstract

来源：Nyström， S.， et al.， 通过高光谱共聚焦显微镜和荧光寿命成像对用发光共轭寡噻吩染色的淀粉样蛋白组织进行成像。J. Vis. Exp. （2017 年）。

本视频演示了使用荧光寿命成像显微镜或 FLIM 分析淀粉样蛋白结构，使用 hFTAA 染料在彩色编码图像中将致密核心显示为蓝/绿，将不稳定的外围显示为红/黄，反映淀粉样蛋白组织。

Protocol

1. 组织样本的制备

注意：许多组织类型可以使用七聚体甲酰噻吩乙酸 （hFTAA） 作为淀粉样蛋白标记物进行成像。hFTAA 对聚集体构象敏感。因此，染色最好在未受干扰的聚集体上进行，没有表位暴露。如果将组织固定保持在最低限度，则可以获得最佳的光谱质量。因此，最好在染色时将新鲜的冷冻材料轻轻固定在乙醇中。然而，也可以在用福尔马林等固定的组织中检测到淀粉样蛋白沉积物。hFTAA 通常能很好地渗透组织。选择与预期成像技术兼容的标本厚度。

1. 如果使用福尔马林固定、石蜡包埋的切片，则应将它们在二甲苯中脱蜡过夜。然后，将切片浸入 99% 乙醇、70% 乙醇、dH₂O 和磷酸盐缓冲盐水 （PBS） 的连续浴中，每个浴 10 分钟。让组织切片在环境条件下干燥。
   注意：

Materials