利用荧光寿命成像显微镜分析组织切片中的淀粉样结构

摘要

来源：Nyström, S., 等 利用高光谱共聚焦显微镜和荧光寿命成像技术对经发光共轭寡噻吩染色的淀粉样组织进行成像。 J. Vis. Exp. (2017).

本视频演示了使用荧光寿命成像显微技术（FLIM）结合hFTAA染料分析淀粉样结构，通过伪彩图像显示致密核心呈蓝/绿色，不稳定边缘呈红/黄色，反映淀粉样蛋白的组织特征。

方案

1. 组织样本的制备

注意： 多种组织类型均可使用七聚甲酰基噻吩乙酸（hFTAA）作为淀粉样蛋白标记物进行成像。hFTAA对聚集体构象具有敏感性，因此染色应优先在未破坏的聚集体上进行，避免表位暴露。为获得最佳光谱质量，应尽量减少组织固定。因此，推荐使用新鲜冷冻组织，并在染色时以乙醇轻柔固定。然而，即使在经甲醛等固定剂处理的组织中，亦可检测到淀粉样沉积物。 例如，甲醛。hFTAA 通常能很好地穿透组织。选择与预期成像技术相适应的样本厚度。

1. 若使用福尔马林固定、石蜡包埋的切片，应将其置于二甲苯中脱蜡过夜。随后将切片依次浸入99%乙醇、70%乙醇、dH₂O和磷酸盐缓冲液（PBS）中，每种溶液浸泡10分钟。让组织切片在常温条件下自然干燥。
   注意：二甲....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
hFTAA/Amytracker545	Ebba Biotech
Dako 荧光封片剂	Agilent technologies	GM304
LeicaDM6000	Leica
Lumen 200	Prior
Spectraview 系统	ASI 谱成像
Spectraview 软件	ASI 谱成像
LSM780	Zeiss
Zen 2010b v6.0 软件	Zeiss
FLIM 系统	Becker & Hickl
Ar/ML 458/488/514	Zeiss
可调谐激光器 In Tune	Zeiss