使用高尔基-考克斯金属染色法对小鼠脑切片中神经元进行显微成像

摘要

来源：Louth, E. L.，等。使用 Golgi-Cox 方法对厚脑切片中的神经元进行成像。J. Vis. Exp. (2017)

本视频通过设定焦平面的上下边界并采集重叠图像，展示了高尔基-考克斯染色的厚脑切片中神经元的成像过程。对多个位置进行成像以确保神经元投射的细节完整，并将这些图像合并以构建三维表征。

方案

所有涉及动物样本的操作均已经过适当的动物伦理审查委员会审核并批准。

1. 高尔基-考克斯染色

1. 脑组织的高尔基-考克斯浸渍法
   1. 配制高尔基-考克斯溶液：将1%（w/v）重铬酸钾和0.8%（w/v）铬酸钾分别溶于高质量水中，混合后加入1%（w/v）氯化汞，用1号滤纸过滤最终溶液。避光保存，最多可使用一个月。
   2. 使用5%异氟烷麻醉小鼠。
   3. 通过断头法处死小鼠，并迅速取出脑组织。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
重铬酸钾	Fisher Scientific	P188-100	危险品
铬酸钾	Fisher Scientific	P220-100	危险品
氯化汞	Fisher Scientific	S25423	危险品
Whatman 1号滤纸	Fisher Scientific	1001-185
异氟烷	Pharmaceutical Partners of Canada	CP0406V2
20 mL 闪烁瓶	Fisher Scientific	03-337-4
蔗糖	Bioshop Canada	SUC700.1
磷酸二氢钠	Sigma Aldrich	S5011-500G
磷酸氢二钠	Sigma Aldrich	S9390-500G
50 mL 锥形管	Fisher Scientific	12-565-271
异戊烷	Fisher Scientific	AC126470010	又称2-甲基丁烷。危险品
琼脂	Sigma Aldrich	A1296-100G
小型称量皿	Fisher Scientific	02-202-100
振动切片机	Leica	VT1000 S
6孔组织培养板	Fisher Scientific	08-772-1b
带网底的组织培养小室	Fisher Scientific	07-200-214
多聚甲醛，16%	Electron Microscope Sciences	15710-S	危险品
氢氧化铵	Fisher Scientific	A669S-500	危险品
Kodak 定影液 A	Sigma Aldrich	P7542
Superfrost plus 载玻片	Fisher Scientific	12-550-15
CitroSolv 透明剂	Fisher Scientific	22-143-975
无水乙醇	Commercial Alcohols	N/A
焦油紫	Sigma Aldrich	C1791
Permount 封片剂	Fisher Scientific	SP15-100
正置显微镜	Olympus	BX53 型号
12 位彩色相机	MBF Biosciences	DV-47d	QImaging 部件号 01-MBF-2000R-F-CLR-12
三维电动显微镜载物台、控制器及编码器	MBF Biosciences	N/A	由 MBF Biosciences 提供并集成至显微镜
4x 显微镜物镜	Olympus	4x 0.16 数值孔径 UplanSApo
10x 显微镜物镜	Olympus	10x 0.3 数值孔径 UPlan FL N
30x 显微镜物镜	Olympus	30x 1.05 数值孔径 UPlanSApo
60x 显微镜物镜	Olympus	60x 1.42 数值孔径 PlanAPO N
硅油浸油	Olympus	Z-81114
Neurolucida 软件	MBF Biosciences	版本 10
ImageJ 软件	美国国立卫生研究院	当前版本	需安装 OME Bio-Formats 插件
Photoshop 软件	Adobe	CS6 版本