转基因小鼠膈肌神经肌肉接头处钙动力学的荧光成像

摘要

资料来源：Heredia， D. J.， et.al. 小鼠隔膜三方突触处细胞特异性钙信号的离体成像。J. Vis. Exp. （2018）

该视频演示荧光成像表达基因编码钙指标的转基因小鼠神经肌肉接头 （NMJ） 的钙动力学。NJM 是通过膈神经隔膜中荧光标记的乙酰胆碱受体来识别的。图像分配器用于同时显示多个信号。传递电刺激，并记录 NMJ 处响应钙内流的荧光变化。

方案

所有涉及动物样本的程序都已经过适当的动物伦理审查委员会的审查和批准。

1.转基因小鼠隔膜和膈神经的制备

1. 购买转基因小鼠和寡核苷酸引物对这些小鼠进行基因分型。
   1. 将一只 3 至 6 个月大的小鼠繁殖，表达一个合适的转基因/敲入 Cre 驱动等位基因拷贝和条件 GCaMP3/6 等位基因的零个拷贝，与第二只同龄小鼠繁殖，表达一个或两个条件 GCaMP3/6 等位基因拷贝和 Cre 驱动等位基因的零拷贝。
   2. 注意：注意：注意：2. 肌肉动作电位的刺激和记录
      1. 注意：
      2. 放大 4 倍，使用显微作器，将抽吸电极移动到左膈神经上，然后拉出连接到抽吸电极的管道的 5 mL 注射器的桶来施加抽吸。
         注意：
      3. 要制备 100 μM BHC，请吸取 4 μL 的 200 mM 原液的 DMSO 溶液，并在 1 mL 的 Krebs-Ringer 溶液中预稀释。
      4. 注意：
      5. 戴上手套，将外径 （OD） 为 1 mm、内径 （ID） 为 0.4 mm 的硼硅酸盐细丝玻璃放入微量移液器拉拔器中，拧紧刻度盘以将其夹入到位，然后关闭拉出器门。
      6. 注意：注意：3. 样品荧光成像
         1. ²⁺响应，运动神经元或雪旺细胞。
         3. <>span style='font-family：Arial，sans-serif;font-size：12pt;font-style：normal;font-variant：normal;font-weight：400;text-decoration：none;vertical-align：baseline;white-space：pre-wrap;'查找表条上的亮度条设置为表达 GCaMP3/6 的组织在 20 倍放大倍率下表现出饱和的水平的 110% 进行实验，而不响应 KCl 进行合并。
      7. ²⁺注意：

材料