在清醒小鼠中同步成像小胶质细胞动态与神经元活动

摘要

来源： Maruoka, H., et. al. 清醒小鼠中同时成像小胶质细胞动态与神经元活动。J. Vis. Exp. (2022)

本视频展示了一种双光子显微成像技术，用于在视觉刺激过程中对清醒小鼠的神经元活动和小胶质细胞动态进行成像，重点呈现钙瞬变及细胞间相互作用。

方案

所有涉及动物模型的操作均已经过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

小胶质细胞与神经元钙动力学的活体双光子成像

1. 小鼠对显微镜装置的适应

1. 手术后三周，使用 3% 异氟烷对小鼠进行麻醉诱导，并利用定制的立体定位仪将小鼠置于双光子显微镜的 25 倍物镜下（图 1C）。在装置设置中，将小鼠放置于跑步机上方，使其能够自由奔跑。
2. 约 10 分钟后，将小鼠从显微镜载物台上取下并放回饲养笼中。在进行双光子成像采集前，每隔一天至少重复训练 3 次。

2. 双光子图像采集

注意：我们建议在手术后超过4周再进行图像采集，因为小胶质细胞的激活会逐渐恢复至基础水平。

1. 使用3%异氟烷对小鼠进行麻醉，并利用定制的立体定位仪将小鼠固定在双光子显微镜的物镜下方。
2. 安装定制的遮光装置（图1A 和 图1B）以及用于视觉刺激的液晶显示器，如下所述（图1D）。
   1. 调整物镜位置，使其聚焦于脑表面，然后将此位置设为初始Z轴位置。保持X-Y坐标不变，抬升物镜；将小鼠及立体定位仪从物镜和跑步机上取下。

结果

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
10英寸液晶显示器	EIZO	DuraVision FDX1003	用于呈现光栅视觉刺激
黑色铝箔	THORLABS	BKF12
CX3CR1-EGFP 小鼠	杰克逊实验室	IMSR_JAX: 005582	CX3CR-1EGFP/+ 基因敲入/敲除 小胶质细胞中表达EGFP的小鼠 在大脑中受……控制 内源性 Cx3cr1 基因座
DENT 硅胶-V	Shofu Inc	N/A	用于遮光装置的安装 将设备连接至头板
头板	定制化	N/A	材料：SUS304，厚度：0.5 mm
异氟烷	辉瑞	N/A
多光子激发显微镜	NIKON	N/A	商品名为“A1MP+”
物镜	尼康	N/A	商品名为“CFI75 apochromat 25xC W”。
Psychtoolbox		免费软件	用于呈现光栅视觉刺激
遮光装置	定制化	N/A
立体定位仪	定制化	N/A	用于在双光子显微镜下固定小鼠 显微镜
跑步机	定制化	N/A