使用光学分馏器技术定量大鼠脑组织中新生成的神经元

摘要

来源：Olesen, M. V.,et al．采用光学分数法估算电休克疗法大鼠模型中的细胞数量．J. Vis. Exp.（2017）．

该视频展示了在脑组织中定量新生神经元的技术。含有溴脱氧尿嘧啶（BrdU）标记神经元的海马组织切片通过免疫组织化学染色，随后采用光学分数法沿组织厚度方向进行定量分析。

方案

所有涉及动物样本的操作均已经过适当的动物伦理审查委员会审核并批准。

结果

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
5'-溴-2'-脱氧尿苷 - BrdU	Sigma-Aldrich	19-160
焦油紫	Sigma-Aldrich	C5042	包含以下材料 1升溶液：0.2克焦油紫；2.0克 乙酸钠，3 H2O；3 ml 冰醋酸 乙酸；1000 ml 蒸馏水 水
冷冻保护剂	丹麦首都大区药房，DK	861334	包含以下材料： 蔗糖；聚乙烯吡咯烷酮 PVP 40；磷酸钠缓冲液（0.2 M）；乙二醇；去离子水 水
dH2O	丹麦首都大区药房，DK	817205
二氨基联苯胺 – DAB	Sigma-Aldrich	D5637
Envision-HRP	DAKO	K4001	过氧化物酶标记的聚合物 偶联山羊抗小鼠 免疫球蛋白
乙醇 - 70 %	Plum A/S	201098
乙醇 - 96 %	Plum A/S	201104
乙醇 - 99.9 %	Plum A/S	201111
胎牛血清	体外	BI-04-003-1A
H2O2 30%	丹麦首都大区药房，DK	896456
HCl	J. T. Baker	6081
封片剂	Sakura	4583	Tissue Tek
小鼠抗BrdU	Becton-Dickinson	347580
PBS缓冲液	丹麦首都大区药房，DK	853436	pH = 7.4
PFA	VWR	28,794,295	pH = 7.4
磷酸盐缓冲液	丹麦首都大区药房，DK	866533	0.1 mol/L，pH 7.4
快速脱水封片介质	Histolab Products AB	801	Pertex
四硼酸钠	默克股份公司	1,063,080,500
蔗糖	默克公司（Merck A/S）	1,076,515,000
Triton X-100	默克股份公司	1,086,031,000
二甲苯	VWR	28,973,363
盖玻片	Menzel-Gläser	24x50 mm #0
冷冻切片机	Leica	CM1860
数字式测微计	海登海因	VRZ 401
玻璃培养皿	脑科学研究实验室	1256
显微镜	尼康	Eclipse 80i
显微镜相机	Olympus	DP72
显微镜载玻片	VWR	48311-703	SuperFrost+
电动载物台	之前	H101A
多孔培养皿容器	Sigma-Aldrich	D6315-1CS	Nuclon 12孔板
New-Cast 软件	Visiopharm	ver. 4.5.6.440
目标 2x	尼康	CFI 平场复消色差 2X 超高数值孔径物镜
4倍物镜	尼康	CFI Plan Fluor 4X
目标 10x	尼康	CFI Plan Fluor 10X
目标 100倍油镜	尼康	CFI Plan Apo Lambda DM 100X 油	数值孔径 1.40
轨道摇床	Gemini BV	CM-9	Sarstedt
载玻片架	樱花	4465
载玻片染色皿	樱花	4457	Tissue-Tek
样品圆盘	徕卡	14037008637
染色网状结构	脑科学研究实验室	2512	25孔