使用光谱反射法测定固定小鼠脑切片中的有髓轴突直径

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所有涉及动物样本的程序均已经过适当的动物伦理审查的审查和批准 style='background-color：#ffffff;line-height：1.79999999999999999;margin-bottom：11pt;margin-top：11pt;text-align：justify;' dir='ltr'>1.校准

1. 成像前至少 1 小时打开显微镜，以允许激光源的热稳定（参见材料表）。然后，打开用于光谱扫描的软件（参见材料表）并单击 GUI 顶部的"获取"按钮（图形用户界面）（）。
2. 图 1a）。
3. 图 1b）。
4. 图 1c）。
   注意：声光分束器） 配置和实时扫描按钮。通过在 AOBS 配置中检查反射来切换光路 （图 1d）。
5. ，幻灯片玻璃）。
6. 注意：即2. SpeRe （光谱反射计） 图像采集
   1. 将镶好的组织放在显微镜载物台上。要将组织大致对准物镜的焦平面，请通过目镜使用宽视场荧光模式。
   2. 实时扫描Multistacked TIF格式保存。
      注意：<span style='font-family：Arial，sans-serif;font-size：12pt;font-style：normal;font-variant：normal;font-weight：400;text-decoration：none;vertical-align：baseline;white-space：pre-wrap;'>实验者可以在此阶段暂停。

   3. 图像处理和分析

   1. Image → Stacks → 绘制 Z 轴配置文件在 ImageJ 菜单上。
   2. Image → Stacks → 绘制 Z 轴配置文件在 ImageJ 菜单上。
   3. 复制和粘贴选项。
      注意：图 1：软件设置。（a）图形用户界面 （GUI）。在主窗口中，主要有五个子面板：成像设置、激光设置、光学设置、探测器设置和图像查看器。（b）用于选择成像模式的下拉菜单。对于 SpeRe（光谱反射法），选择 xyλ。（c）用于调整检测器光谱窗口的面板。（d）用于设置声光分束器 （AOBS） 的面板。选择"反射率"是为了将反射光引导到探测器。