阿尔茨海默病小鼠脑切片中甲氧基-X04标记的淀粉样斑块的可视化与定位

摘要

来源： Bisht, K., et. al．利用相关光学显微镜与电子显微镜研究小胶质细胞与 β-淀粉样蛋白斑块的相互作用．J. Vis. Exp. (2016)

本视频展示了利用荧光显微镜和明场显微镜对阿尔茨海默病小鼠脑切片中甲氧基-X04标记的淀粉样斑块进行可视化与定位，从而实现斑块与解剖结构的精确定位关联，用于研究阿尔茨海默病的病理特征。

方案

所有涉及动物样本的操作均已经过适当的动物伦理审查委员会审核并批准。

1. 筛选含甲氧基-X04染色斑块的脑组织切片

1. 借助立体定位小鼠脑图谱，选择包含目标区域的脑切片，例如本示例中使用的海马CA1区。将每张切片放入含有足够冷冻保护液的24孔培养板的孔中，以防止切片干燥。
2. 依次检查每张切片，避免其干燥，操作步骤如下：
   1. 使用一次性移液器将一滴磷酸盐缓冲液（PBS）加到显微镜载玻片上，并将切片置于液滴中。
   2. 在荧光显微镜下观察切片，识别含有甲氧基-X04标记的Aβ斑块的区域。
      注意： 使用荧光紫外（UV）滤光片（激发波长340–380 nm）可轻松观察甲氧基-X04。
3. 在明场和荧光模式下采集目标区域（ROI）的图像，且不移动显微镜载物台，因为每张图像必须在两种模式下显示同一区域，以便将斑块的存在直接与组织切片的结构区域相关联。
4. 根据动物编号保存并命名所采集的图像。同时记录培养板中的孔号以及所拍摄图像的视野。例如：9978A1B；动物编号：9978；孔号：A1；视野：明场。成像完成后，将切片放回其对应的孔中。
   注意： 最终，对每张被检查的切片将获得两张图像，一张为明场，另一张为紫外场。
5. 在ImageJ中打开同一目标区域的两张图像（一张明场，一张紫外场），使用MosaicJ插件对齐两张图像的边缘，并根据其来源孔号保存对齐合并后的图像。
6. 将图像保存在以特定动物编号命名的独立文件夹中。合并图像以识别和定位组织切片中的斑块，并在两种不同视野（明场和紫外场）下全面观察整个切片。
7. 完成筛选后，将已检查的切片保存在含有冷冻保护液的24孔培养板中，置于-20 °C冰箱中，直至进行免疫染色或其他后续处理。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
Methoxy-X04	Tocris Bioscience	4920	每片含10 mg底物
显微镜载玻片	Fisher Scientific	12-550-15
24孔组织培养板	Fisher Scientific	353047
乙二醇	Fisher BioReagents	BP230-4
甘油	Fisher BioReagents	BP229-4