使用原子力显微镜对小鼠脑组织中分离的多聚核糖体进行成像

摘要

来源： Lunelli, L., et. al. 原子力显微镜观察脑多聚核糖体J. Vis. Exp.(2016)。

本视频展示了利用原子力显微镜对多聚核糖体进行成像的方法。经镍离子包被的云母片可固定带有附着核糖体的RNA。样品经洗涤、干燥后，安装至显微镜载物台上。微悬臂探针扫描样品表面，记录激光偏转信号以构建表面拓扑图。通过软件校正图像畸变，实现多聚核糖体高分辨率结构的可视化。

方案

注意：为避免样本中RNA降解，所有缓冲液均须使用经DEPC处理的水配制，以最大限度减少RNase污染。

结果

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
环己酰亚胺	Sigma	1810	裂解液制备
DNA酶I	Thermo Scientific	89836	裂解液制备
RiboLock RNA酶抑制剂	Life technologies	EO-0381	裂解液制备
DEPC	Sigma	40718	裂解液制备
Triton X100	Sigma	T8532	裂解液制备
DTT	Sigma	43815	裂解液制备
脱氧胆酸钠	Sigma	D6750	裂解液制备
微量离心机	Eppendorf	5417R	裂解液制备
蔗糖	Sigma	S5016	蔗糖梯度制备
超速离心机	Beckman Coulter	Optima LE-80K	蔗糖梯度离心
超速离心机转子	Beckman Coulter	SW 41 Ti	蔗糖梯度离心
聚碳酸酯离心管	Beckman Coulter	331372	蔗糖梯度离心
密度梯度分馏系统	Teledyne Isco	67-9000-176	蔗糖梯度分馏
原子力显微镜	Asylum Research	Cypher	多聚核糖体成像