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Research Article
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
资料来源：Kimmelmann-Shultz， B.， et.al. 使用近红外荧光和高分辨率扫描来测量啮齿动物大脑中的蛋白质表达。J. Vis. Exp. （2019）
该视频演示了一种用于测量啮齿动物大脑中蛋白质表达的近红外荧光和高分辨率扫描方法。
所有涉及动物样本的程序均已由适当的动物伦理审查委员会审查和批准。
1. 成像
1.将载玻片放在近红外扫描界面上，组织朝下。使用选择工具一次对一张载玻片或多张载玻片进行成像。
2. 使用最高质量设置的图像载玻片，偏移量为 0 nm，分辨率为 21 μm。扫描通常需要 13-19 小时，具体取决于所使用的扫描设备。
3. 将图像导入图像分析软件（例如 Image Studio）进行查看和标记以进行半定量蛋白质分析。
2.蛋白表达分析
1.打开图像分析软件，然后选择图像扫描到的 工作区 。
2. 在图像分析软件中打开扫描图像以查看扫描结果，并调整查看的波长，以及显示的对比度、亮度和放大倍率，而不会改变原始图像或总量化发射。
3. 确定需要定量的关键区域，选择页面顶部的分析选项卡，然后选择绘制矩形（或绘制椭圆/ 徒手绘制） 在将被量化的区域上绘制一个矩形。
4. 要查看矩形的大小，请选择屏幕左下角的形状，然后选择右下角的{{}}列。添加 Height 和 Width 列来识别形状大小。
注：在比较定量时控制形状大小很重要。建议在所需的定量位置内使用相同的形状，以便对该区域的发射进行准确采样。
5. 然后为形状命名并重复。对所有区域进行采样后，可以聚合和分析 列 选项卡中可用的数据。
