利用近红外荧光与高分辨率扫描测量啮齿类动物脑组织中的蛋白质表达

摘要

来源： Kimmelmann-Shultz, B., 等。利用近红外荧光与高分辨率扫描检测啮齿类动物脑组织中的蛋白表达。 J. Vis. Exp. (2019)

本视频展示了一种近红外荧光与高分辨率扫描方法，用于测量啮齿类动物大脑中的蛋白质表达。

方案

所有涉及动物样本的操作均已被相应的动物伦理审查委员会审核并批准。

1. 成像

1. 将载玻片放置在近红外扫描界面上，组织面朝下。可使用选择工具一次成像一个或多个载玻片。

2. 使用最高质量设置对切片进行成像，偏移量为 0 nm，分辨率为 21 μm。扫描通常需要 13−19 小时，具体时间取决于所使用的扫描设备。

3. 将图像导入图像分析软件（例如 Image Studio），以进行半定量蛋白质分析的查看和标记。

2. 蛋白质表达分析

1. 打开图像分析软件，并选择已扫描图像的 工作区 。

2. 在图像分析软件中打开扫描图像以查看扫描结果，并调整所显示的波长、对比度、亮度和放大倍数，但不得更改原始图像或总定量发射信号。

3. 确定用于定量的关键区域，然后选择页面顶部的 分析 选项卡，接着选择 绘制矩形 （或 绘制椭圆/ 手绘绘制），在需要定量的区域上绘制矩形。

4. 要查看矩形的尺寸，请在屏幕左下角选择 图形，然后在右下角选择 列。添加 高度 和 宽度 列以确定图形尺寸。

注意：在进行定量比较时，控制形状大小至关重要。建议在目标定量区域内放置相同的形状，以准确采样该区域的发射信号。

5. 然后命名该区域并重复上述操作。当所有区域均完成取样后，可汇总并分析“列”选项卡中可用的数据。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
玻璃显微镜载玻片	Fischer Scientific	12-549-6
Licor Odyssey 扫描仪	Licor Biotechnology Inc.
Image Studio	Licor Biotechnology Inc.