在EAE小鼠模型中进行生物发光成像

摘要

来源： Schmitz, K., et al., 小鼠多发性硬化EAE模型中视神经炎和脑部炎症的生物发光与近红外成像。 J. Vis. Exp. (2017)。

本视频展示了利用生物发光成像技术对实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）诱导的视神经炎症进行可视化和监测的方法。内容包括小鼠的固定、试剂注射以及连续图像采集，以监测生物发光信号随时间的变化。

方案

所有涉及动物模型的操作均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 视神经炎与脑炎症的生物发光成像

1. 成像系统的设置
   1. 使用能够分析生物发光和近红外信号的任何设备进行活体成像。
   2. 所有成像过程中，将小鼠置于2-2.5%异氟烷麻醉状态下。
   3. 使用中间的气体供应装置将一至两只小鼠并排置于仪器中，使上脊柱位于中心位置。
   4. 为评估药物效果，需同时使用两只小鼠进行成对比较，每组各一只。这对于生物发光成像至关重要。
   5. 用黑布遮盖免疫接种部位，并在距离相机6.5 cm处使用B聚焦拍摄照片和基线图像，以评估小鼠位置的准确性。所有图像均采用此设置。
2. 生物发光炎症探针的注射与成像
   1. 使用 体内 成像系统设置：透射生物发光成像，发射滤光片开启，激发滤光片阻断，光圈 fstop 1，binning 8，焦距 B = 6.5 cm，自动曝光 120 s；采集本底图像。
   2. 腹腔注射100 µL即用型化学发光试剂（40 mg/mL）。注射前充分混匀，再抽取至注射器中。
   3. 注射后5、10和15分钟采集生物发光图像。不同动物间生物发光峰值的时间进程存在差异。
      注意： 峰效应将在注射后5至10分钟出现；若15分钟时信号下降，则表明无需进一步成像。采用对照组与处理组的小鼠配对，以消除因不同时间进程导致的微小偏差。
   4. 填写与实验相关的描述。观察自动弹出的对话框，其中包含小鼠品系、性别、时间点、探针注射时间、分组等信息。 等等将所有文件保存在同一个文件夹中；这些文件将包含时间标签和所有描述信息。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
XenoLight RediJect 炎症探针	Perkin Elmer, Inc., Waltham, USA	760535	成像探针，可被氧化酶激活，适用于炎症成像
PLP139-151/CFA 乳剂	Hooke Labs, St Lawrence, MA	EK-0123	EAE 诱导试剂盒
IVIS Lumina Spectrum	Perkin Elmer, Inc., Waltham, USA		生物发光与红外成像系统
LivingImage 4.5 软件	Perkin Elmer, Inc., Waltham, USA	CLS136334	IVIS 分析软件
异氟烷	Abbott Labs, Illinois, USA	26675-46-7	麻醉剂