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使用连续块面扫描电子显微镜对神经元线粒体进行成像

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2025年5月29日

本文内容

摘要

来源: Mukherjee, K., et. al. 利用连续块面扫描电子显微镜分析脑线粒体。 J. Vis. Exp. (2016)

本视频展示了利用连续块面扫描电子显微镜(SBFSEM)对小鼠脑组织进行制备、成像和分析的方法,以观察线粒体的超微结构,从而精确描绘其在轴突和树突神经元区室中的形态特征与空间分布。

方案

所有涉及动物样本的操作均经相应的动物伦理审查委员会审核并批准。

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材料

本文使用的材料清单
姓名公司目录编号评论
C57BL/6J 小鼠杰克逊实验室664
异氟烷VETone,商品名 Fluriso501017
解剖托盘Fisher ScientificS65105
解剖剪Ted Pella Inc.1316
蝴蝶针Exel International26704
磷酸盐缓冲液Sigma-AldrichP4417-100TAB
滤膜(0.45 微米)EMD MilliporeNC0813356
解剖显微镜OlympusSZ61
振动切片系统Ted Pella Inc.Vibratome 3000
二甲胂酸钠EMS12300
单宁酸EMS21700
亚铁氰化钾J.T. Baker14459-95-1
四氧化锇 4% 溶液EMS19150
硫代碳酰肼EMS21900
L-天冬氨酸Sigma-AldrichA93100
氢氧化钾Acros Organics43731000
硝酸铅EMS17900
EMbed-812 包埋试剂盒EMS14120包含 Embed 812 树脂、DDSA、NMA 和 DMP-30。
25% 电镜级戊二醛Polysciences Inc.1909
多聚甲醛EMS19202
醋酸铀酰EMS22400
乙醇EMS15055
丙烯氧化物EMS20400
包埋模具EMS70907
铝制样品针EMS70446
胶体银液体EMS12630
剃刀EMS72000
超级胶水(Loctite Gel Control)Loctite234790
导电环氧树脂Ted Pella Inc.16043
扫描电子显微镜蔡司Sigma VP
用于扫描电镜的腔内超薄切片机Gatan 公司3View2可针对其他扫描电镜进行设计
用于针头制备的修整显微镜Gatan 公司作为3View系统的一部分提供
低电压背散射电子探测器Gatan 公司3V-BSED
ImageJ/Fiji 处理软件包ImageJ 版本 1.50b,FIJI 下载于 2015 年 10 月 1 日http://zoi.utia.cas.cz/files/imagej_api.pdf
http://rsb.info.nih.gov/ij/
http://www.icmr.ucsb.edu/programs/3DWorkshop/Uchic-2015_FIJI_Tutorial.pdf
http://fiji.sc/TrakEM2

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