转染小鼠原代大脑皮层细胞的延时成像

摘要

来源：Landeira, B. S.,et al., 利用二维培养系统对原代大脑皮层细胞进行活体成像。J. Vis. Exp. (2017)

该视频展示了利用延时成像技术追踪荧光标记的皮层前体细胞，监测其分裂与分化过程，并研究原代大脑皮层细胞的谱系发育。

方案

1. 时间序列视频显微镜

注意：此步骤需要配备培养箱的倒置荧光显微镜（参见材料表）。

1. 逆转录病毒感染后，将组织培养板放入与温度和 CO₂ 控制器相连的培养箱中。
   注意：建议在开始成像前 3 小时预热成像室，以尽量减少采集过程中的漂移和失焦。
   注意：成像室应维持细胞处于恒定的 37 °C 和 5% CO₂ 条件下。
2. 在 XY 轴上选择一个位置作为零点（XY = 0），以便将来可再次准确定位。
   注意：建议在培养板上绘制一个标记，用作确定零点的参考。
3. 在 10 倍放大倍数下选择待成像的位置。
   注意：每孔选择 10–15 个位置，以提高观察到逆转录病毒转染细胞的概率。
   注意：可使用长工作距离的高倍物镜（20 倍或 40 倍）获取更高分辨率的图像。根据物镜的工作距离，可能需要使用玻璃底培养板。
4. 每 5 分钟采集一次相差图像，每 3 小时采集一次荧光图像，以降低光毒性。在实验开始的前 3 小时内检查并调整焦距，因为温度平衡过程中焦距可能发生改变。此后每天检查并调整一次焦距。
   注意：我们观察到焦距在前 24 小时后趋于稳定。但建议持续监测焦距变化。也可使用基于软件的自动对焦系统。
5. 7 天后停止图像采集。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
ImageJ	美国国立卫生研究院
tTt	苏黎世联邦理工学院
细胞观察显微镜	Zeiss
追踪工具（tTt）软件		https://www.bsse.ethz.ch/csd/software/ttt-and-qtfy.html