使用扫描电子显微镜观察小鼠脑脉络丛

摘要

来源：Van Wonterghem, E., et al. 小鼠脉络丛的显微解剖与整体安装扫描电子显微镜观察. J. Vis. Exp. (2022)

本视频演示了使用扫描电镜（SEM）对小鼠脑内脉络丛组织进行制备与成像的过程。该过程包括组织固定、脱水以及涂覆导电铂层，以稳定样本并使其适用于成像。扫描电镜可获取具有微绒毛的上皮细胞的精细图像，从而揭示该组织的结构特征。

方案

所有涉及动物样本的实验程序均已经过适当的动物伦理审查委员会审核并批准。

1. 使用扫描电子显微镜（SEM）对脉络丛（CP）组织进行形态学分析

注意：以下处理步骤中使用了有毒溶液，建议在通风橱内进行样品制备。

1. 按照下述方法进行SEM样品制备。
   1. 将新鲜分离的CP转移至新配制的固定液中，固定液含2%多聚甲醛和2.5%戊二醛，溶于0.1 M Na-卡可基酸盐缓冲液（pH 7.4）。于4 °C孵育过夜。
      注意： 由于CP组织非常脆弱且薄，应将其置于小型标本篮中（参见 材料表) 在缓冲液之间转移。通过这种方法，组织的结构将得到更好的保存。使用基于卡考基酸盐（cacodylate）的固定剂而非基于磷酸盐缓冲盐水（PBS）的固定剂，因为强效的卡考基酸盐缓冲液能够中和电镜固定剂中戊二醛的低pH值。
   2. 用 3–5 mL 0.1 M Na-卡考基酸缓冲液（pH 7.4）洗涤样品，每次 5 分钟，共洗涤 3 次。
   3. 在0.1 M Na-卡可基酸缓冲液中加入3-5 mL的2%四氧化锇，将样品后固定30分钟。用3-5 mL超纯水洗涤样品，每次5分钟，共洗涤3次。
   4. 在一系列冰冻的、浓度递增的乙醇（EtOH）溶液（50%、70%、85%、100%）中依次脱水，每种浓度的EtOH溶液处理15分钟....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
铝制样品台	EM Sciences	75220
二甲胂酸盐缓冲液	EM Sciences	11652
碳导电胶带 -12 mm	EM Sciences	77825-12
临界点干燥仪	Bal-Tec	CPD030
Crossbeam 540	Zeiss		扫描电镜系统
镊子	Fine Science Tools GmbH	91197-00
戊二醛	EM Sciences	16220
四氧化锇	EM Sciences	19170
多聚甲醛	Sigma-Aldrich	P6148
磷酸盐缓冲液（PBS）	Lonza	BE17-516F
铂	Quorum	Q150T ES	不含 Ca⁺⁺、Mg⁺⁺ 或酚红的 PBS；经无菌过滤
不锈钢样品篮	EM Sciences	70190-01