使用扫描电子显微镜对小鼠脑脉络丛进行可视化

Abstract

资料来源：Van Wonterghem， E.， et al.小鼠脉络丛的显微解剖和全安装扫描电子显微镜可视化。J. Vis. Exp. （2022）

本视频演示了使用扫描电子显微镜 （SEM） 制备和成像小鼠大脑的脉络丛组织。该过程包括组织固定、脱水和涂覆导电铂层，以稳定和准备成像样品。SEM 通过微绒毛捕获上皮细胞的详细图像，从而深入了解组织的结构特征。

Protocol

所有涉及动物样本的程序均已由适当的动物伦理审查委员会审查和批准。

1. 使用扫描电子显微镜 （SEM） 对脉络丛 （CP） 组织进行形态学分析

注意： 在以下处理步骤中使用有毒溶液。建议在通风橱中进行样品制备。

1. 如下所述进行 SEM 样品制备。
   1. 将新鲜分离的 CP 转移到新鲜制备的固定溶液中，该溶液在 0.1 M 二甲胂酸盐缓冲液 （pH 7.4） 中含有 2% 多聚甲醛和 2.5% 戊二醛。在4 °C下孵育过夜。
      注：由于CP组织非常脆弱和薄，因此应将组织放入小样品篮中（见材料表）以在缓冲液之间转移。这样，组织的结构将得到更好的保留。基于二甲胂酸盐的固定剂优于基于磷酸盐缓冲盐水 （PBS） 的固定剂，因为强二甲胂酸盐缓冲液可以抵消 EM 固定剂中戊二醛的低 pH 值。
   2. 用 3-5 mL 的 0.1 M 二甲胂酸钠缓冲液 （pH 7.4） 洗涤样品 3 次，每次 5 分钟。
   3. 将样品后固定在 3-5 mL 2% 四氧化锇的 0.1 M 二甲胂酸盐缓冲液中 30 分钟。用 3-5 mL 超纯水洗涤样品 3 次，每次 5 分钟。
   4. 将样品在一系列乙醇 （EtOH） 浓度递增（50%、70%、85%、100%）的冰冷溶液中脱水，每个 EtOH 溶液 15 分钟。使用临....

Materials