使用微型望远镜对小鼠内侧前额叶皮层进行实时钙成像

摘要

来源：Thapa， R.， et.等人， 用于深部脑的立体定向病毒注射和梯度折射率晶状体植入 体内 钙成像。 J. Vis. Exp. （2021）

该视频演示了使用微型内窥镜对转导小鼠进行实时钙成像，将神经元活动与行为相关联。

方案

微型显微镜安装和体内 Ca²⁺ 成像（图 1）

1. 将微型显微镜安装到其底座
   在
   1. 感应室中短暂麻醉鼠标（5% 异氟醚和 1 L/min 氧气流速）。将鼠标放在干净的工作台面上。
   2. 用小螺丝刀松开锁定螺丝，取下保护盖，然后用浸有丙酮的棉签清洁 GRIN（渐变折射率镜头）镜头的表面。
   将
   3. PTFE 胶带（聚四氟乙烯胶带）紧紧缠绕在微型显微镜螺纹上，并将微型显微镜固定在鼠标头部的底座上。
   4. 将微型望远镜连接到电缆（图 2K），然后打开 NeuView 软件。
   5. 在 NeuView 中，单击硬件，选中 LED1，然后单击流按钮查看实时图像（图 3A）。
   6. 通过调整微型显微镜相对于底座的位置来确定最佳焦平面，在钝钳的帮助下稍微收紧或松开。
      注意：最佳焦平面是通过比较几个可能的位置并选择对大多数细胞体具有清晰可视化的位置来确定的。
   7. 拧紧锁定螺钉，将鼠标放回其原壳固定架中。
   8. 在 NeuView 中，将 LED ....

结果

图 1：实验程序的示意图概述。（A）在 mPFC（内侧前额叶皮层）立体定向注射病毒。（B）GRIN（梯度折射率晶状体）晶状体植入 mPFC。（C）将微型瞄准镜底座固定在小鼠头骨上。（D）微型显微镜安装和 体内 钙成像。

材料