利用多光子延时成像技术观察斑马鱼胚胎中神经嵴细胞的迁移

摘要

来源：Williams, A. L., et al. 利用多光子延时成像技术实时可视化发育过程：斑马鱼胚胎中迁移的神经嵴细胞的可视化. J. Vis. Exp. (2017)

本视频展示了一种多光子延时成像方案，可用于高分辨率实时观察斑马鱼胚胎中神经嵴细胞的迁移过程。

方案

所有涉及动物模型的操作均已经过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 用于延时成像的显微镜设置

1. 确定激光参数

1. 确定所用激光波长。应使用等于目标荧光团激发波长两倍的波长（例如，对于绿色荧光蛋白（GFP），波长范围为 880 至 940 nm）。
注意： 在本研究中，GFP 的波长设置范围为 880 至 940 nm。波长越高，激光的输出功率越低。

2. 确定激光透射率。过高的激光透射率会杀死胚胎，应使用最低的透射水平（推荐做法）。对于本文所述的24至48小时的延时成像研究，透射率应保持在5%以下。

3. 确定显微镜检测系统，并确保为荧光染料安装了正确的滤光片。
注意： 对于多光子显微镜，存在多个具有不同发射荧光灵敏度的检测系统。通常情况下，内置检测系统的灵敏度低于外置检测系统。对于GFP表达水平较高的转基因品系，内置检测系统已足够。而对于GFP表达水平较低的转基因品系或其他荧光染料（例如，红色荧光蛋白），可能需要使用外置检测系统，以将激光透射率维持在合理水平。无论使用何种检....

结果

图1. 装置设置。A. 胚胎固定装置的各个组件，包括开放式浴槽室、快速交换平台和载物台适配器。B. 开放式浴槽室的组装。C. 将2%琼脂糖溶液（60–70 °C）加入开放式浴槽室中。D. 在荧光显.......

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
TC SP5 MP 多光子显微镜	Leica Microsystems CMS GmbH
Mai Tai DeepSee 钛宝石激光器	SpectraPhysics
激光安全防护箱	Leica Microsystems CMS GmbH
Leica Application Suite X (LAS X) 软件	Leica Microsystems CMS GmbH
Photoshop CS 6 版本 13.0 x64 软件	Adobe
iMovie 版本 10.1.4 软件	Apple
开放式浴槽腔室	Warner Instruments	RC-40HP	高型
快速交换平台	Warner Instruments	QE-1	35 mm
载物台适配器	Warner Instruments	SA-20LZ-AL	16.5 x 10 cm
低熔点琼脂糖	ISC Bioexpress	E-3112-25	GeneMate 筛网 GQA 低熔点琼脂糖，25 g
玻璃盖玻片	Fisher Scientific	12-545-102	圆形盖玻片，直径 25 mm
高真空润滑脂	Fisher Scientific	14-635-5C	2.0 磅装管。DOW CORNING CORPORATION 1658832