经皮附睾精子抽吸与处理技术

摘要

来源：
Li Xiaoming¹, Liu Xiao¹, Li Haiyang¹, Cai Xiaohua¹, Ou Jianping<sup>1

1</sup>中山大学附属第三医院生殖医学中心。

本视频演示了从无精子症患者中经皮穿刺抽取附睾精子的过程。无精子症是一种精液中缺乏精子的病症。该操作包括对阴囊区域进行消毒，使用含有特殊培养液的注射器抽取附睾液，并对采集的样本进行处理以分离出具有活力的精子。制备后的精子可用于先进的不孕症治疗程序。

方案

所有涉及人类参与者的操作均按照机构、国家和国际有关人类福祉的指南进行，并已通过当地机构审查委员会的审查。

1. 术前准备

1. 手术用品准备
   1. 准备手术所需用品，包括一套外科器械包、两支配备0.7 mm针头（0.7 × 32细壁长斜面，TWLB）的5 mL注射器、60 mL消毒液、两副无菌橡胶手套和一片无菌粘性敷料。
   2. 请护士检查经高压蒸汽灭菌的外科器械包是否存在破损或过期情况。确认无异常后，将其放置于器械台上并打开外层包装。
   3. 泌尿男科医师需佩戴无菌橡胶手套，随后打开器械包内层，检查灭菌指示胶带是否合格，并确认包内所有器械齐全。
   4. 准备两支配备0.7 mm针头（0.7 × 32 TWLB）的5 mL注射器用于麻醉和手术操作，随后打开含有利多卡因注射液的安瓿瓶。
   5. 使用一支5 mL无菌注射器抽取利多卡因注射液，随后排出注射器内的气泡。
2. 手术患者准备
   1. 为患者进行皮肤准备。使用一次性剃刀剃除会阴部阴毛，并用肥皂水清洗会阴及周围皮肤，确保无多余阴毛或污渍残留。
   2. 将患者置于手术台上的截石位，脱去裤子，并将上衣固定于脐部以上，充分暴露脐以下的会阴部及下腹部。
   3. 调整无影灯角度，以充分照亮患者的阴囊区域。
   4. 使用卵圆钳夹持一块无菌纱布球，将其完全浸入消毒液中以启动消毒程序。按照以下顺序由外周向阴囊进行皮肤消毒：下腹部、大腿前侧及内侧、会阴区、阴茎和阴囊。
   5. 完成初次消毒后，更换无菌纱布球并重复消毒过程。经过三轮消毒后，术前皮肤消毒流程即告完成。
   6. 消毒完成后开始铺设无菌巾。首先在患者臀部下方放置一块无菌方巾，然后在手术区域及其周围铺置带孔的无菌洞巾，使阴囊完全暴露于洞巾的开口区域。
3. G-MOPS-PLUS培养液准备
   1. 请胚胎培养室技术人员使用无菌巴斯德吸管将约2 mL G-MOPS-PLUS培养液转移至培养皿中。盖好皿盖后，通过传递窗送至手术室护士。
   2. 将培养皿放置于器械台上的无菌巾上，并打开皿盖。
   3. 使用另一支5 mL注射器吸取约0.2 mL G-MOPS-PLUS培养液，随后排出气泡以备后续使用。

2. 麻醉与手术

1. 对于男科医生：右手持装有利多卡因注射液的注射器，左手固定患者的精索。皮下穿刺后注入少量利多卡因形成皮丘。再次进行皮下穿刺，并深入至精索组织内，在确认无回血后开始注射约0.5 mL利多卡因。为获得更好的精索阻滞麻醉效果，可在同一穿刺点改变进针方向2至3次，并重复向精索内注射利多卡因的操作。
2. 左手握住患者阴囊，固定需要穿刺的附睾。右手通过触诊确认手术所需穿刺部位的附睾位置。然后，右手持上述含有利多卡因的注射器，在穿刺部位皮下注射利多卡因，以实现局部浸润麻醉。
3. 左手握住患者阴囊，固定需要穿刺的附睾。然后，右手持含有G-MOPS-PLUS培养液（0.2 mL）的5 mL注射器，垂直于皮肤穿刺，进入附睾组织。保持注射器负压状态，反复穿刺附睾组织，使附睾液在负压作用下经针头吸入注射器内。
4. 继续保持负压，缓慢退出穿刺针。将抽吸出的附睾液注入培养皿中。完成注射后，吸取邻近的G-MOPS-PLUS培养液冲洗注射器，以最大限度地将收集到的附睾液全部注入培养皿中。

3. 手术标本的处理

1. 附睾精子的搜索与观察
   1. 通过传递窗将含有G-MOPS-PLUS培养液和附睾液的培养皿移交给胚胎实验室技术人员。
   2. 胚胎培养室技术人员接收培养皿后，将其放置于倒置光学显微镜载物台上并固定。打开显微镜电源开关，旋转光线调节按钮至适当光强。
   3. 旋转倒置光学显微镜的转换器，选择10倍物镜，依次调节粗调和细调焦螺旋以调整焦距。观察聚焦情况，并在显微镜下搜寻附睾精子。
   4. 继续旋转倒置显微镜转换器至40倍物镜，调节细调焦螺旋以调整焦距，逐视野观察附睾精子。评估附睾精子的数量与质量。可见正常附睾精子已成熟并获得运动能力。
2. 附睾精子的处理
   1. 观察到足够数量的活动附睾精子后，使用无菌巴斯德吸管将培养皿中的液体转移至15 mL离心管中。
   2. 将上述离心管置于天平托盘上，使用相同规格并装有无菌水的离心管进行平衡配重。
   3. 打开离心机门，将离心管对称放入卡槽中，然后关闭离心机门。通过控制面板设置离心力为500 × g，离心时间为5分钟。按下控制面板上的 START 按钮，启动离心过程。
   4. 离心过程完成后，打开离心机门，取出含有附睾液的离心管。拧开管盖，用无菌巴斯德吸管轻轻吸除上清液，并弃去所吸取的上清液。
   5. 使用无菌巴斯德吸管，向离心管中加入约2 mL G-IVF-PLUS培养液。然后轻轻吹打离心管中的液体，充分重悬沉淀。
   6. 重复平衡、离心及去除上层液体的操作步骤。
   7. 根据卵胞浆内单精子注射（ICSI）的需求，使用无菌巴斯德吸管向离心管中加入约0.5 mL G-IVF-PLUS培养液，并轻轻吹打离心管底部的附睾精子，使其充分悬浮。
   8. 将充分悬浮的附睾精子直接用于ICSI操作。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
离心机	Origio MAXI	G123511110440	最大转速：4000;最大RCF： 2826 x g
离心管	猎鹰	352095	15 mL
组合试管架	深圳市智诚隆科技有限公司	无
培养皿	猎鹰	353001	35 毫米 x 10 毫米
消毒液	上海利康消毒科技有限公司	20230801S	60毫升
G-IVF PLUS	瑞典维创生命瑞典AB	511574	培养物附睾液治疗液
G-MOPS PLUS	Vitrolife瑞典AB	511712	穿刺手术用培养液
高安全性胚胎巴斯德吸管	达尔文	D2208003	230毫米， 火抛光
仪器表		DZ202012010
倒置光学显微镜	奥林巴斯		IX71
盐酸利多卡因注射液		H31021072	5毫升 ： 0.1 克
医疗天平	上海光正医疗器械有限公司	201609-4854	JYT-2
医用外科口罩	广州市番禺区浩正卫生材料厂	161220328	17.5×9.5厘米（展开尺寸 17.5×17 cm）
电动手术台	山东明泰医疗设备有限公司	YZB0089-2011	手术台
自粘伤口敷料	广州亚田生物科技有限公司 LTD	20142140348	6 cm x 7 cm（3 cm x 4 cm）
一次性无菌皮下注射器	山东威高集团医用高分子制品有限公司	20230921	5 mL， 配备0.7毫米（0.7 x 32TWLB）
无菌无粉乳胶手术手套	北京瑞晶乳胶制品有限公司	2023030322	71/2、61/2
手术器械包	中山大学附属第三医院供应部	10228376	高压灭菌器灭菌
手术灯	上海吉顺医疗器械制造有限公司	JSL2009-160D
垂直流洁净台	苏州万达净化科技有限公司 LTD	DS-CZ-1311006	SH-CJ-2FD-1500