来源：Ciraku, L., et. al．一种用于研究和靶向乳腺癌脑转移肿瘤生长的离体脑切片模型．J. Vis. Exp．(2021)。
本视频展示了在器官型小鼠脑切片中对表达荧光素酶的肿瘤细胞进行成像的过程。将荧光素加入培养基中，然后将培养板放入活体成像系统的暗室中。调整图像采集参数，界定肿瘤的形态和大小，随后记录肿瘤细胞发出的生物发光信号。
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方法文章
利用生物发光成像评估类器官小鼠脑切片中的肿瘤生长
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2025年6月18日
本文内容
摘要
方案
所有涉及动物样本的操作均已经过适当的动物伦理审查委员会审核并批准。
注意： 本研究使用了6-8周龄的Nu/Nu裸鼠雌鼠。
1. 肿瘤细胞的颅内注射
- 将所有器械（镊子、剪刀、缝合剪、手钻）放入灭菌袋中，并放入灭菌指示剂，使用高压灭菌器的干循环模式灭菌，最长45分钟。若对多只动物进行手术，每只动物之间须使用加热珠灭菌器对器械进行灭菌（最多3次）。
- 根据使用者的动物护理方案对小鼠进行麻醉（例如，异氟烷：4% 用于诱导，1-2% 用于维持），并在手术开始前给予镇痛处理（皮下注射，0.1 mL，0.1 mg/kg 缓释型丁丙诺啡 SR-LAB）。通过脚趾夹捏反应确认麻醉深度是否适宜。
- 将小鼠置于立体定位仪框架中，并使用标准耳杆固定头部（图1A然后，将眼用软膏涂抹于眼睛。
- 在切口前，使用碘伏棉签和70%乙醇交替反复擦拭头部表面3次，以进行表面消毒。
- 使用手术刀沿假想的将小鼠大脑分为两个对称半球的中线，以略呈斜角的方式在皮肤上做一个1 cm的正中切口，以暴露颅骨。用棉签擦去任何血液。
- 将皮肤向侧方牵开以暴露注射位点：以颅骨冠状缝为参照，向右2 mm，向前1 mm（+2ML，+1RC）。
- 使用钻头（0.73 mm）在前囟前2 mm、右侧1 mm处穿透颅骨，并施加轻微压力并旋转钻孔。
- 使用脑部注射器，将5 µL含100,000个MDA....
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结果
图1. 颅内注射、脑切片制备及体外脑转移瘤生长 （A）在立体定位仪下对小鼠进行颅内注射的示意图。（B）向4-6周龄Nu/Nu小鼠注射5 x 10⁵个细胞后，通过生物发光检测肿瘤的代表性图像。5 MDA-MB-231BR-GFP-Luciferase 细胞注射后第12天。（C）细胞生成过程的示意图
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材料
| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| 1 mL 注射器，滑动接头 | BD | 309659 | |
| 30 G1/2 针头 | BD | 305106 | |
| 6孔板 | 杰内西 | 25-105 | |
| 自动化显微镜与LUMAVIEW软件 | Etaluma | LS720 | |
| B27（GEM21） | Gemini Bio-Products | 400-160 | |
| 50 mL 烧杯 | Fisher | 10-210-685 | |
| 钝头貂毛画笔，5/0号 | 电子显微镜科学公司 | 66100-50 | |
| 骨蜡 | ModoMed | DYNJBW25 | |
| 脑部注射器 | Hamilton公司 | 80430 | |
| CaCl₂ | Fisher Scientific | BP510-250 | |
| D-荧光素钾盐 | Perkin Elmer | 122799 | |
| 双面剃须刀片 | VWR | 55411-060(95-0043) | |
| 定量滤纸（#1），圆形，4.25 cm | Fisher | 09-805a (1001-042) | |
| 2/0号细毛松鼠毛画笔 | 电子显微镜科学公司 | 66100-20 | |
| 镊子 | Fine Science Tools | 11251-20 | |
| 葡萄糖 | Sigma Aldrich | G8270 | |
| 谷氨酰胺（200 mM） | 康宁 CellGrow | 25-005-Cl | |
| 微型手钻套装，含微型麻花钻头 | 亚马逊 | YCQ2851920086082DJ | |
| HEPES，游离酸 | Fisher Scientific | BP299-1 | |
| 仅用于小鼠的立体定位仪框架 | 哈佛仪器公司（美国马萨诸塞州霍利斯顿） | 72-6049, 72-6044 | |
| KCl | Fisher Scientific | S271-10 | |
| 大型手术剪 | Fine Science Tools | 14001-18 | |
| MDA-MB-231BR 细胞 | 由 Patricia Steeg 博士惠赠 | 参考文献 14 | |
| MgCl₂·6H₂O | Fisher Scientific | M33-500 | |
| 小鼠成像设备 | Perkin Elmer | IVIS 200 系统 | |
| 小鼠成像软件 | Caliper Life Sciences（美国马萨诸塞州沃尔瑟姆） | Living Image 软件 | |
| 微孔板读板仪 | Tecan Spark | ||
| 封片液 | Invitrogen | P36935 | |
| MTS试剂 | Promega CellTiter 96 Aqueous One Solution | （货号：G3582） | |
| N2 补充剂 | Life Technologies | 17502-048 | |
| Neurobasal 培养基 | Life Technologies | 21103049 | |
| Nu/Nu 无胸腺小鼠 | 查尔斯河实验室（美国马萨诸塞州威尔明顿） | ||
| 多聚甲醛 | Affymetrix | 19943 | |
| 青霉素/链霉素 | Life Technologies | 145140-122 | |
| 聚丙烯缝合线 | Medex 供应 | ETH-8556H | |
| 聚维酮碘棉签棒 | DME Supply USA | 货号：689286X | |
| 11号手术刀片（每包100片） | Fine Science Tools | 10011-00 | |
| 3号手术刀柄 | Fine Science Tools | 10003-12 | |
| 丙酮酸钠 | Sigma Aldrich | S8636 | |
| 刮勺/探针 | Fine Science Tools | 10090-13 | |
| SS双面未涂层剃须刀片（American Safety Razor Co (95-0043)） | VWR | 55411-060 | |
| 蔗糖 | Amresco | 57-50-1 | |
| 手术刀 | Exelint International | D29702 | |
| 组织切片机 | 布林克曼 | （麦克伊尔万型） | |
| 组织培养小室 | Millipore | PICMORG50 或 PICM03050 |
