通过三维成像技术在脑切片中实时监测基因表达

本文内容

摘要

在本视频中，利用转基因小鼠胚胎的皮层脑片培养物，通过三维成像技术监测基因表达。采用生物发光、荧光和明场成像方法，可视化观察神经元在天然组织内分化过程中的实时基因表达。

方案

所有涉及动物样本的操作均已经过适当的动物伦理审查委员会审核并批准。

在脑片培养物中可视化荧光素酶报告基因表达
1. 在开始解剖前启动发光活体成像系统。皮质脑片培养的条件如下：40% O₂、5% CO₂ 和 37 °C。
2. 在40倍物镜上滴加浸油。将样品皿放置于显微镜载物台上。获取荧光测试图像，并在激发光照射下，将成像位置和焦平面设定至目标区域。
3. 进行为期24小时的延时成像，采集三维图像（包括发光、荧光和明场图像）（图1F-H）。发光图像采集的相机参数设置如下：低转移速率（50 kHz）、2×2 或 4×4 像素合并、曝光时间10分钟/5分钟。荧光和明场图像采集的参数设置如下：中等转移速率（1 MHz）、1×1 像素合并、曝光时间100毫秒。

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结果

图1：制备胚胎端脑的皮层切片并可视化皮层切片培养中 Dll1 蛋白的动态变化。（A） 使用荧光体视显微镜检测 EGFP 的表达。红色箭头指示表达 EGFP（增强型绿色荧光蛋白）的皮层区域。左半球（a）、右半球（b）和中脑（c

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材料

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