利用近红外荧光成像技术观察小鼠脑血栓

摘要

来源：Kim, D. E., et al. 联合近红外荧光成像与显微计算机断层扫描直接可视化脑血栓栓塞。 J. Vis. Exp. (2016)

本视频展示了近红外荧光（NIRF）成像技术，用于观察经纤维蛋白特异性探针标记的离体脑组织中的血栓。近红外光激发该探针，使血栓产生荧光，从而在大脑主要动脉及小皮层血管中实现高对比度的血栓可视化。

方案

所有涉及动物样本的操作均经相应的动物伦理审查委员会审核并批准。

1. 离体 脑组织近红外荧光（NIRF）血栓成像

1. 处死动物后，去除头皮，并从枕骨大孔开始沿矢状缝方向用剪刀剪开颅骨。使用剪刀小心抬起切开的颅骨边缘，避免损伤下方脑组织，从而暴露大脑半球。
2. 尽可能靠近脑表面切除脑底部的视神经，以防止其与需在近红外荧光（NIRF）成像中观察的Willis环（COW）动脉重叠。随后，为清晰显示Y形结构的“大脑中动脉（MCA）/大脑前动脉（ACA）/远端颈内动脉（ICA）”，在轻压小脑基底部以暴露切割位置后，尽可能贴近脑表面切除远端ICA（图1A）。
3. 将取出的脑组织底部朝上进行近红外荧光成像（激发/发射波长：675 / 690 nm；曝光时间1秒）（图1B, C），以显示Willis环动脉内荧光标记的血栓栓子（图1D）。随后将脑组织顶点朝上进行额外成像，以观察皮层内的血栓栓子。成像过程中应滴加数滴生理盐水于组织表面，避免脑组织干燥。

结果

图1：概述 离体近红外荧光（NIRF）成像技术用于脑血栓栓塞的检测 （A 和 B）从一只患有血栓栓塞性卒中的小鼠中取出具有代表性的脑组织。在取出脑组织时，需注意防止在颈内动脉远端（ICA，蓝色箭头）的大脑中动脉（MCA）与大脑前动脉（ACA）分叉区域丢失血栓栓子（...

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
仪器
NIRF 成像系统	Roper-scientific,Tucson, AZ	Coolsnap-Ez
手术显微镜	Leica Microsystems, Seoul, Korea	EZ4HD
软件
Image J 软件	Wanye Rasband, NIH, USA	1.49d	图像分析
显微镊子	Fine Science Tools, Vancouver, Canada	11253-27	Dumont L5
显微剪刀	Fine Science Tools, Vancouver, Canada	15000-03	Vannas 弹簧剪
剪刀	Fine Science Tools, Vancouver, Canada	14084-08	8.5 cm
黑色丝线缝合线	Ailee, Busan, Korea	SK6071, SK728	6-0 和 7-0
试剂
TTC	Amresco, Ohio, USA	0765-100g
C15 光学探针			合成