免疫活性小鼠胶质母细胞瘤模型的生物发光成像

摘要

来源：Clark, A.J., 等. 胶质母细胞瘤免疫活性动物模型的生物发光成像。J. Vis. Exp. (2016)

本视频展示了在免疫功能健全的小鼠模型中，利用表达荧光素酶的肿瘤细胞和荧光素，通过生物发光成像技术无创定量监测胶质母细胞瘤进展的方法。

方案

所有涉及动物模型的操作均已经过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. GL261 肿瘤生长的生物发光成像

1. 将足量的消毒剂（0.05% 氯化二甲基铵溶液）喷洒在一张洁净的纸巾上。使用浸有消毒剂的纸巾彻底擦拭成像室内的黑色底板、鼻锥和隔板，这些部位将与动物直接接触。随后用一张洁净干燥的纸巾彻底擦干所有表面。重复上述步骤一次，并静置5分钟。
2. 启动成像系统。
3. 通过腹腔注射方式，给予小鼠300 μl的混合溶液，其中包含200 μl的氯胺酮/赛拉嗪和100 μl的荧光素（D-荧光素钾盐，150 mg/kg）以进行麻醉。
4. 注射后等待10分钟，通过轻捏尾巴确认小鼠是否已完全进入麻醉状态。设置成像系统时，选择“生物发光”模式、“自动”曝光时间以及“中等”像素合并（binning）模式。将小鼠放置于成像台上，点击“采集”按钮开始成像。确保每次成像时距离注射的时间保持一致。
5. 成功获取图像后，应出现图像窗口和工具面板。点击感兴趣区域（ROI）或“ROI工具”，从圆形图标中选择“自动”模式。为定义感兴趣区域，在图像上圈选信号区域，然后以光子/秒/球面度/平方厘米（photons/sec/sr/cm²）为单位对ROI进行定量测量。
6. 将小鼠从成像室中取出，并持续观察直至其恢复自主活动能力并表现出正常行为。通常恢复时间约为15分钟。在小鼠完全从麻醉中恢复之前，不得将其放回与其他动物共用的笼具中。
7. 每周进行两次生物发光....

结果

图1. 荧光素酶表达不影响体内肿瘤生长和动物存活率。 （A）生物发光监测显示颅内植入的GL261.Luc（表达荧光素酶的GL261胶质母细胞瘤细胞）肿瘤在C57BL/6小鼠中呈进行性生长。（B）Kaplan-Meier生存分析显示，颅内植入GL261细胞（实线）或GL261.Luc细胞（虚线）的小鼠在总体生存率上无显著差异。

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材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
D-荧光素钾盐	Gold Biotechnology	LUCK-100	避光保存
Living Image 软件	Caliper Life Sciences	Contact for Quote	无特殊要求
Xenogen Lumina	Caliper Life Sciences	Contact for Quote	无特殊要求
氯胺酮（Ketaset）	Pfizer	NDC 0856-2013-01	管制物质
赛拉嗪（Xylazine）	Sigma-Aldrich	23076-35-9	无特殊要求
28 G 针头（带注射器）	Fisher	22-004-270	又称胰岛素注射器
加热垫	Dunlap	HP950
PDI 酒精消毒片	Fisher	23-501-711