从沉积物中通过超声提取脂质生物标志物

1. 准备必要的材料

1. 样品（如叶片、土壤、真菌、树皮、组织）通常在提取前需经过冷冻、冻干、研磨和均质化处理，为提高效率可批量提取。本实验提取三个样品。
2. 根据样品量的不同，可使用体积范围为 4–60 mL 的小瓶。本实验采用 40 mL 硼硅酸盐玻璃小瓶及耐溶剂瓶盖。小瓶、硼硅酸盐玻璃移液管和称量锡箔皿应在使用前于 550 °C 下灼烧 6 小时 ，以确保去除可能的有机污染物。
3. 二氯甲烷和甲醇是大多数有机地球化学实验室常用的溶剂。它们可单独用于实验器具和玻璃器皿使用前的冲洗。许多实验室采用二氯甲烷（DCM）与甲醇（MeOH）按 9:1 比例混合的溶剂体系，以高效提取具有广泛极性的生物标志物。所用溶剂应不含有机污染物。
4. 使用室温下的超声水浴。市面上主要科学仪器供应商提供多种规格的超声仪，可选择带加热或不带加热的超声处理设备。
5. 应将防水的试管架放入超声水浴中。
6. 需在经溶剂认证的化学通风橱中操作。

2. 样品制备

1. 将一个已灼烧的称量锡箔置于天平上，归零去皮。
2. 用溶剂冲洗实验室药匙，然后用其将适量样品转移至称量锡箔中，并记录样品质量。
   1. 样品质量取决于其有机质含量。有机质含量较低的材料（如海洋泥沙）可能需要数克，而有机质含量较高的材料（如叶片组织）则所需质量少得多。
3. 将称量锡箔中的全部样品转移至一个已灼烧、预先称重并标记好的样品瓶中。盖紧瓶盖，然后丢弃称量锡箔。
4. 对每个待提取的样品重复执行步骤 2.1 - 2.3 。

3. 提取

1. 使用预先灼烧过的移液管和洗耳球，将约 20 mL 的二氯甲烷:甲醇（9:1）混合液转移至每个小瓶中（小瓶应大约半满）。在进行下一个样品操作前，立即盖好小瓶盖子，以防止挥发性溶剂蒸发。
   1. 二氯甲烷和甲醇的挥发性不同。若样品小瓶未加盖，提取溶剂的蒸发可能改变其极性，从而影响提取效果。
2. 将样品小瓶放入防水的小瓶架中。
3. 检查超声水浴中的水位，确保水深仅足以浸没样品小瓶至提取溶剂的顶部。水过多可能导致小瓶漂浮；水过少则可能使样品无法充分震荡。
4. 将装有样品的小瓶架直接放入超声水浴中。
5. 在室温下超声处理 30 分钟。
6. 从超声仪中取出样品架。若提取的是沉积物，静置 30 分钟以使颗粒充分沉降。若需提取另一批样品，此时可将其放入超声仪中。
7. 使用预先灼烧过的移液管和洗耳球，将提取小瓶中的二氯甲烷:甲醇混合液转移至另一个预先称重、预先灼烧并已标记的 40 mL 小瓶中。
8. 对所有样品重复步骤 3.1 至 3.7，共进行 3 次。
9. 将提取后的样品置于通风橱中，打开瓶盖，用铝箔 loosely 覆盖，在小瓶中自然干燥。标记为“提取残留物”并妥善保存。
10. 将每个样品的合并提取物标记为“TLE”。