索氏提取法从沉积物中提取脂质生物标志物

1. 材料的准备与设置

1. 采集一份冷冻、冻干、研碎并均质化的海洋沉积物样品。此类样品含有制作标准品所需的多种化合物。
   1. 标准品通常由岩芯取样航次或分析后剩余的沉积物制成。例如，在本实验中，提取的沉积物来自科德角正南方向的“泥质区”（Mud Patch）。该沉积物是在一次岩芯取样航次中采集的，但不会用于回答科学问题，因此可用于制作标准品。
   2. 将约100 g的沉积物样品放入冰箱中冷冻过夜，使其完全冻结。
   3. 待沉积物完全冻结后，开启冻干机（可从Fisher等多家科学仪器供应商处获得），并等待冷凝器达到设定温度（通常约为-30 °C）。
   4. 将沉积物样品装入冻干机中，关闭排气阀，开始对样品抽真空。
   5. 根据沉积物中的含水量及样品大小，样品可能需要数天时间才能完全干燥。
   6. 样品干燥后，关闭冻干机，通气平衡压力，然后取出样品。
   7. 将样品放入经溶剂清洗过的研钵中，用研杵研磨成粉末。对整个样品进行研磨，并将其储存于玻璃瓶中，置于冰箱中冷冻，待提取时使用。
2. 根据样品大小，使用体积为4–60 mL的样品瓶。本实验中使用40 mL的硼硅酸盐玻璃瓶及耐溶剂瓶盖。在使用前，将样品瓶、硼硅酸盐玻璃移液管和称量盘在550 °C下灼烧6小时，以确保去除可能的有机污染物。
3. 获取二氯甲烷和甲醇（这两种溶剂在大多数有机地球化学实验室中常见），并在使用前分别用它们冲洗实验器具和玻璃器皿。许多实验室采用二氯甲烷（DCM）与甲醇（MeOH）按9:1比例混合的溶剂体系，以高效提取具有广泛极性的生物标志物。所用溶剂应不含有机污染物。
4. 准备索氏提取装置用于本实验（可从Fisher Scientific或其他科学仪器供应商处购买），并在使用前清洗并以550 °C灼烧6小时。
5. 获取玻璃纤维萃取套管（可从Whatman公司购买），并在使用前于550 °C下灼烧6小时。

2. 样品制备

1. 将一个灼烧过的称量锡皿放在天平上归零去皮。
2. 用溶剂冲洗实验室刮勺，然后用其将适量样品转移至称量锡皿中，并记录样品质量。
   1. 样品质量取决于其有机质含量。有机质含量较低的材料（如海洋泥）可能需要数克，而有机质含量较高的材料（如叶片组织）则可能需要更少的量。
3. 将称量锡皿中的全部样品转移至一个灼烧过的玻璃纤维滤筒中。

3. 提取

1. 将约400 mL的二氯甲烷:甲醇（9:1）混合液转移至圆底烧瓶中（烧瓶应填充超过一半），并放入加热套中。加入数个（5–10个）经溶剂冲洗过的沸石。
2. 将样品套管开口端朝上放入索氏提取器的中心部件中。
3. 将中心部件置于圆底烧瓶上方，并用玻璃器皿夹固定。
4. 将冷凝管安装在索氏提取器中心部件的上方，并用玻璃器皿夹固定。
5. 使用软管夹将冷凝管的一根冷水进水管连接至通风橱的冷水管道，另一根则引至排水口。
6. 打开水源，确保水流循环正常且排水通畅。
7. 开启加热套，调节温度，使圆底烧瓶中的溶剂保持轻微沸腾状态。
8. 在接下来的一小时内多次监测提取过程。
   1. 检查温度是否已正确调节至轻微沸腾，溶剂是否在冷凝管中冷凝并滴入中心部件，中心部件是否正常充液和排空，以及水流是否正常排入通风橱的排水口。
9. 在接下来的36小时内持续监测提取过程。
   1. 确保温度保持在轻微沸腾状态，溶剂在冷凝管中正常冷凝并滴入中心部件，中心部件充液和排空正常，水流正常排入通风橱排水口，且圆底烧瓶中的溶剂液面仍保持约一半以上。
10. 36小时后，关闭加热套以停止提取。
11. 将烧瓶标记为 "TLE"。